Isolation, cultivation and identification of deformed wing virus of honeybees (Apis mellifera L.) in the Republic of Belarus | Выделение, культивирование и идентификация вируса деформации крыла пчелы медоносной (Apis mellifera L.) в Республике Беларусь

Russian. Из всех вирусов, обнаруженных у медоносной пчелы Apis mellifera L., наибольшее распространение приобрел вирус деформации крыла (ВДК), основным переносчиком которого является клещ Varroa destructor. Впервые в Республике Беларусь сотрудниками РУП «Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н. Вышелесского» выделен ВДК из тканей пчелы медоносной с использованием первично-трипсинизированной культуры клеток фибробластов эмбрионов кур (ФЭК) и проведена его молекулярно-генетическая идентификация. Для выделения вируса были отобраны живые взрослые рабочие медоносные пчелы и куколки, которые имели клинические признаки болезни. В качестве источника вирусного материала были использованы голова, грудь, ноги и крылья данных пчел. Брюшко пораженных пчел было удалено асептически. Гомогенизация материала проводилась механическим способом с добавлением питательной среды Игла и ГЛА. Для получения первично-трипсинизированной культуры ФЭК использовались развивающиеся куриные эмбрионы в возрасте 10 суток. Для заражения вируссодержащим материалом были использованы культуральные матрасы со сформировавшимся полным монослоем ФЭК. Конечное разведение вируссодержащего материала в зараженных матрасах группы № 1 составило 1:20, в опытной группе № 2 – 1:200, контроль материала от заведомо здоровых пчел – 1:20. Для идентификации выделенного вирусного материала методом полимеразно-цепной реакции были подобраны праймеры с учетом следующих критериев: они не должны образовывать шпилек и димеров, не должны быть комплиментарны к вирусам и бактериям, циркулирующим у пчел. По сравнению с вирусным материалом, полученным непосредственно от пчел, в вирусном материале после культивирования в культуре ФЭК наблюдалось увеличение концентрации вируса в 1,9 и 7,4 раза (зараженные матрасы группы № 1 и № 2).

English. Deformed wing virus (DWV) is the most common among all the viruses found in the honeybee Apis mellifera L., the main carrier of which is the mite Varroa destructor. Employees of the RUE “Institute of Experimental Veterinary Medicine named after S.N. Vyshelessky” isolated a DWV from the tissues of the honeybee using a primary trypsinized culture of chicken embryo fibroblast cells (EFC) and carried out its molecular genetic identification for the first time in the Republic of Belarus. Living adult working honeybees and pupae with clinical signs of the disease were selected for virus isolation. The head, chest, legs, and wings of these bees were used as a source of viral material. The abdomen of the bees was removed using aseptic techniques. The homogenization of the material was carried out mechanically with the addition of the nutrient medium Igla and GLA. To obtain primary trypsinized culture EFC developing chicken embryos at the age of 10 days were used. For infection with the virus-containing material culture mattresses with a complete EFC monolayer were used. The final dilution of the virus-containing material in infected mattresses of group 1 was 1:20, in the experimental group 2 – 1: 200, the control of material in obviously healthy bees was 1:20. To identify the isolated viral material, primers were selected using the polymerase chain reaction, taking into account the following criteria: they should not form studs and dimers, they should not be complementary to viruses and bacteria circulating in bees. There was an increase in virus concentration of 1.9 and 7.4 times (infected mattresses of groups No. 1 and No. 2) in viral material after cultivation in culture EFC, in comparison with viral material obtained directly from bees