Desarrollo y validación de un enzimoinmunoensayo para el diagnóstico de Leptospirosis bovina

Spanish; Castilian. La leptospirosis es una zoonosis de distribución mundial que afecta a los animales y al hombre. En el ganado bovino causa numerosas pérdidas económicas. El diagnóstico de laboratorio se basa generalmente en la serología. La técnica serológica de referencia internacional es la aglutinación microscópica (MAT). El objetivo de este trabajo fue desarrollar un ELISA para la determinación de anticuerpos específicos IgG anti-leptospiras en sueros bovinos y validarlo frente a la técnica de referencia (MAT). Los sueros fueron evaluados por MAT, utilizando 8 serovares de Leptospira interrogans. Para el ELISA, se utilizó como antígeno el extracto sonicado de un cultivo serovar hardjo (cepa Hardjoprajitno). Se evaluaron 535 sueros de bovinos, 356 MAT positivos y 179 MAT negativos. Al valor de corte óptimo recomendado por la curva ROC, la sensibilidad del ELISA frente a la MAT fue de 99.4% (IC 95%= 98.0-99.9) y la especificidad de 96.1% (IC 95%= 92.1-98.4), con un kappa de 0.96 (p<0.001). El valor de área bajo la curva ROC fue de 0.995 (IC 95%= 0.984 - 0.999), lo que indicó una alta confiabilidad del ELISA. En zonas donde se desconocen los serovares prevalentes o existen varios serovares circulantes, este ELISA presentaría la ventaja respecto de las técnicas serovar-específicos, ya que puede detectar infección mediante la aplicación de un solo ensayo, utilizando material no infectivo. Este ensayo es además repetitivo, de interpretación objetiva y simple de implementar en laboratorios no especializados. En conclusión, este ELISA IgG género específico desarrollado podría ser una alternativa útil para el diagnóstico de bovinos infectados con lepto

English. Leptospirosis is a worldwide zoonotic disease that affects most domestic and wild animals as well as man. In cattle, leptospirosis causes agalactiae, abortion and other reproductive disorders. The diagnosis is based primarily on serology. The international reference serologic test, the Microscopic Agglutination Test (MAT), is the most commonly used. An enzyme-linked inmunosorbent assay (ELISA) for detecting IgG anti-Leptospira antibodies in bovine serum was developed and validated with the MAT. Sonicated antigen from cultures of serovar hardjo (strain Hardjoprajitno) was used for the ELISA. Strains of 8 serovars of Leptospira interrogans were used for the MAT. Serum samples from 535 bovine, 356 MAT positive and 179 MAT negative, were evaluated. At the optimal cut-off point recommended by receiver operating characteristic (ROC) curve analysis, the sensitivity and specificity values of the ELISA were 99.4% (95% CI= 98.0-99.9) and 96.1% (95% CI= 92.1-98.4) respectively. Concordance between ELISA and MAT measured by Kappa (k), was 0.96 (p< 0.001). The value for the area under this ROC curve was 0.995 (CI 95% =0.984-0,999), indicating a high level of accuracy for this ELISA. In comparison with serovar-specific assay this assay could detect Leptospira-infection by using only one test, specially in areas where the prevalent serovars are unknown. This assay has several advantages: it uses non hazardous reagents, it is repeatable, it is scored objectively and easy to perform in non specialized laboratories. In conclusion, this genus-specific IgG ELISA may constitute a very useful tool for the diagnosis of leptospiral infection in cattle