Optimización de las condiciones de biobalística de baja presión para análisis de expresión transitoria de genes heterólogos en hojas de tabaco cultivadas in vitro

Spanish; Castilian. Los estudios de expresión transitoria de genes heterólogos de interés biotecnológico son un paso previo a su expresión estable en plantas transgénicas. El objetivo del trabajo fue optimizar las condiciones de biobalística para realizar ensayos de expresión transitoria de genes heterólogos en Nicotiana tabacum variedad Xanthi (tabaco) utilizando la pistola de genes de baja presión Helios® Gene Gun (BioRad®). Como gen heterólogo se utilizó al promotor 35S de CaMV fusionado al gen uidA (GUS) clonado en el vector pBI121. Las condiciones evaluadas fueron: presión de disparo, número de disparos y distancia de disparo sobre discos de hojas u hojas completas de tabaco cultivadas in vitro. La expresión de GUS se evaluó como el promedio del número de puntos azules observados en los tejidos bombardeados. únicamente se consideraron puntos azules cuando se utilizaron hojas completas de tabaco. Se observó un mayor número de puntos azules cuando se empleó una presión de 160 psi, cuatro disparos y un bombardeo directo sobre hojas completas. Para confirmar las condiciones obtenidas se utilizó el vector pCAMBIA 1305.2, observándose un alto número de puntos azules en los tejidos bombardeados, indicativo de la eficiencia de las condiciones optimizadas en el presente trabajo.

English. Transient expression studies of heterologous genes with biotechnological interest are a prerequisite to its stable expression in transgenic plants. The aim of this research was to optimized the biobalistic conditions for testing transient expression of heterologous genes in tobacco (Nicotiana tabacum - Xanthi) using the low pressure Helios® Gene Gun System (Biorad ®). As heterologous gene construction was used CaMV 35S promoter fused to the uidA (GUS) gene cloned into the vector pBI121. The optimized conditions were: shot pressure, number of shots and shooting distance of leaf fragments or full sheets of tobacco. GUS expression was evaluated by average number of the blue dots observed on plant tissues already bombarded. Only blue dots were observed when whole leaves tobacco were used. A great deal of blue spots was observed using the following conditions: a pressure of 160 psi, 4 shots and 0 cm on whole sheets. In order to confirm the conditions earlier obtained, the pCAMBIA 1305.2 vector was employed in this experiment. Higher numbers of blue points were observed in tissues previously bombarded; those were as an indicative of the efficiency experimental conditions earlier optimized.