Clonagem, expressão e endereçamento protéico da Enterotoxina B de Staphylococcus aureus em Lactococcus lactis

Portuguese. Staphylococcus aureus é um microrganismo frequentemente encontrado associado à microbiota da pele, trato respiratório superior e trato gastrointestinal. No entanto, mesmo sendo comensal em grande parte da população humana, S. aureus pode infectar os animais, incluindo os homens, e o grau de severidade das doenças varia desde lesões superficiais até a morte. Alguns problemas associados à infecção por S. aureus é a emergência de bactérias multi-resistentes e a habilidade de produzir biofilmes em diferentes tipos de superfícies. Dentre os principais fatores de virulência destacam-se as enterotoxinas estafilocócicas (SEs), as quais são comuns entre as linhagens invasivas de S. aureus já isoladas e desempenham papel relevante no estabelecimento e manutenção das infecções provocadas por esse patógeno. As SEs estão, portanto, entre os principais fatores de virulência potenciais para o desenvolvimento de vacinas mais eficazes contra as infecções provocadas por este patógeno. O desenvolvimento e a produção de novas vacinas têm sido estimulados pela utilização de microrganismos vivos como veículos celulares para a produção e a apresentação de antígenos. Neste contexto, a utilização de Bactérias Lácticas como veículos vacinais têm se revelado uma alternativa de vacinação extremamente interessante por serem consideradas seguras (“GRAS”) e capazes de estimular uma resposta imune de mucosa, tornando-as excelentes candidatas a vacinas orais. Nesse contexto, nosso grupo de pesquisa vem preconizando a implementação de novas estratégias vacinais utilizando Lactococcus lactis, a bactéria láctica modelo, como candidata ao desenvolvimento de novas, seguras, e mais econômicas vacinas de mucosa. Dessa maneira, este trabalho, que está inserido em um amplo projeto que visa avaliar a eficácia da utilização de linhagens recombinantes de L. lactis contra a infecção por S. aureus, se propôs a construir linhagens de L. lactis produtoras da forma citoplasmática e secretada da Enterotoxina B de S. aureus (SEB). Para tanto, a sequência codificadora de SEB foi isolada por PCR, clonada nos vetores do sistema XIES: pXylT:CYT e pXylT:SEC e a construção foi utilizada para transformar linhagens de L. lactis. As linhagens recombinantes obtidas foram submetidas à indução e avaliação da expressão gênica da proteína de interesse. Assim, a construção dessas linhagens, além de desenvolver uma nova alternativa para a produção desse antígeno, constitui um primeiro passo para o desenvolvimento de uma nova estratégia vacinal contra a infecção por S. aureus.