Influence of integrity of cellskeleton and calcium elements of extracellular stores on the functional status of defrosted spermatozoa | Влияние целостности элементов цитоскелета и кальция внутриклеточных депо на функциональный статус размороженных сперматозоидов

Russian. Криоконсервация спермы - важный инструмент репродуктивных технологий, однако качество замороженной спермы остается невысоким. Предположено, что предварительная инкубация сперматозоидов быков до замораживания в присутствии определенных соединений может способствовать улучшению ее качества после разморозки. Предварительную инкубацию проводили с применением гепарина, который стимулирует в сперматозоидах быков увеличение количества капацитированных клеток. Другие используемые соединения - пролактин (ПРЛ) и гуанозинтрифосфат (ГТФ), при инкубации не увеличивали число капацитированных сперматозоидов. Добавление гепарина стимулировало освобождение Са2+ из внутриклеточных депо сперматозоидов быков, содержание которого снижалось в присутствии ингибитора полимеризации микрофиламентовцитохалазина Д, тогда как ингибитор полимеризации микротрубочек нокодазол не влиял на этот процесс. Активированное совместным действием ПРЛ и ГТФ освобождение Са2+ из внутриклеточных депо сперматозоидов отменялось в присутствии нокодазола, в то время как цитохалазин Д не влиял на этот процесс. После разморозки сперматозоидов увеличивается число капацитированных клеток, и чем их больше, тем хуже образец.С помощью хлортетрациклинового теста обнаружено, что после предварительной капацитации в присутствии гепарина, последующего замораживания и размораживания отмечалось снижение количества капацитированных сперматозоидов, в то же время использование для предварительной инкубации ПРЛ и ГТФ не приводило к уменьшению числа капацитированных клеток в размороженной сперме. Таким образом, предварительная инкубация сперматозоидов быков перед замораживанием в присутствии гепарина, действие которого связано с микрофиламентами, приводила к снижению числа капацитированных клеток после размораживания, что может свидетельствовать о возможном улучшении качества спермы после размораживания.

English. Sperm cryopreservation is an important tool of reproductive technologies, but the quality of frozen sperm remains low. It has been suggested that pre-incubation of bovine spermatozoa before freezing in the presence of certain compounds may provide to improving the quality of sperm after thawing. Pre-incubation was carried out with using of heparin, which stimulate an increase in the number of capacitated spermatozoa during incubation. Other compounds, which were used - prolactin (PRL) and guanosine triphosphate (GTP), did not increase the number of capacitated cells during incubation. The supplementation of heparin stimulated Ca2+ release from intracellular depots of bull spermatozoa, which was inhibited by microfilament polymerization inhibitor -cytochalasin D, while microtubule polymerization inhibitor nocodazole did not affect this process. The release of Ca2+ from intracellular sperm depots activated by complex action of PRL and GTP was canceled by nocodazole, while cytochalasin D did not affect this process. After thawing of sperm, the number of capacitated cells increases, and the higher their number is, the worse the sample is. By using chlortetracycline probe it was found that after preliminary capacitation conducted by heparin, subsequent freezing and thawing, the decrease in the number of capacitated cells was observed at the same time the usage of PRL for pre-incubation and GTP did not lead to the drop in the number of capacitated cells among thawed bovine spermatozoa. Thus, pre-incubation of bovine sperm before freezing in the presence of heparin, whose action is associated with microfilaments, led to a decrease in the number of capacitated cells after thawing that may indicate a possible improvement of sperm quality after thawing.