Intranemaspermic and plasmatic alkaline phosphatase in horse frozen semen
1997
Ducci, M. | Martelli, F. | Frateschi, T.L. (Pisa Univ. (Italy). Dipartimento di Anatomia, Biochimica e Fisiologia Veterinaria) | Demi, S. (Pisa Univ. (Italy). Istituto di Patologia Speciale e Clinica Medica Veterinaria) | Tedeschi, D. | Gazzano, A. | Villani, C.
English. Alkaline phosphatase (ALP) shows some variations in male gonads, in the epididimus, and in the prostate against acute or chronic toxicity due to different molecules. It has been shown the importance of ALP as an enzymatic marker of the semen energetic status after the freezing and the tawing of the ejaculates. The aim of this study was to develop a method of intranemaspermic and seminal plasma ALP recover in horse frozen semen. Four different experimental protocols have been developed to obtain repeatable and reliable results of the enzimatic ALP activity. So we must wash the spermatozoa to eliminate the ALP residual from seminal plasma or from diluting solution of frozen semen. In fact in these compartments ALP is strongly concentrated respect to the intranemaspermic compartment. Moreover, the sonication to recover the enzyme is hardly reliable because of the poor repeatability of this procedure. Finally TritonX-100, used to break the spermatozoa membrane, does not disturb the enzyme assay, like in other enzyme assays
Show more [+] Less [-]Italian. Sono state osservate variazioni della fosfatasi alcalina (ALP) nelle gonadi maschili, nell'epididimo e nella prostata in risposta a tossicita' acute o croniche dovute a diverse molecole; inoltre e' stata dimostrata l'importanza della fosfatasi alcalina come marker enzimatico dello stato energetico del seme dopo i processi di congelamento e scongelamento a cui e' sottoposto l'eiaculato. Lo scopo di questa ricerca e' stato quello di mettere a punto un sistema di recupero della ALP intranemaspermica e dal plasma seminale di seme congelato di cavallo. Per ottenere risultati ripetibili e affidabili dal dosaggio dell'attivita' dell'enzima sono stati approntati 4 diversi protocolli sperimentali, dai quali e' risultato che esiste la necessita' di un lavaggio forzato degli spermatozoi per eliminare residui di ALP presenti nel plasma seminale o nei diluitori del seme congelato in concentrazioni elevatissime rispetto a quella intranemaspermica. Inoltre e' stato osservato come la sonicazione non sia un procedimento sicuro per il recupero dell'enzima dagli spermatozoi, a causa della sua scarsa ripetibilita'. Infine, il TritonX-100, utilizzato per rompere la membrana degli spermatozoi, non disturba l'analisi di questo enzima, come spesso avviene per altri, ed e' stata quantificata una diluizione utile per lo scopo che era stato prefissato
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