Transfection of hamster cells with sheep centromeric sequences induces double minutes and microchromosomes

English. [The structural analysis of sheep centromeric heterochromatin has allowed us the isolation of a phage clone, 17/3pc, which, when transfected in hamster K20 cells, is able to induce amplification processes with formation of new chromosomal structures, as microchromosomes and double minutes. FISH experiments show that the amplification processes involve both the transfected 17/3pc phage clone and ribosomal genes. Molecular analysis showed that the heterochromatic region represented in 17/3pc clone is made of the junction between centromeric satellites I and II. Moreover, the region corresponding to satellite I is interrupted by the about 3 Kb insertion made up of a Long Terminal Repeat (LTR) of 1.4 Kb reported in bovine genome and by a 1.6 Kb region in which an Open reading frame (ORF) has been identified codifying for inverse transcriptase, a bovine SINE, named art2, and a 12 bp region which, when transfected in mammalian cells, is able to induce amplification of regions contiguous to its integration site. The described experimental system is potentially useful for the construction of new vectors for both in vitro and in vivo transfer of genes]

Italian. L'analisi strutturale dell'eterocromatina centromerica di pecora ci ha permesso l'isolamento di un clone fagico, 17/3pc, che, quando transfettato in cellule di hamster della linea K20, innesca processi di amplificazione con formazione di nuove strutture cromosomali, quali microcromosomi e double minutes. Esperimenti di FISH dimostrano che i processi di amplificazione coinvolgono sia il clone fagico 17/3pc transfettato, sia i geni ribosomali. L'analisi molecolare ha dimostrato che la regione eterocromatica rappresentata nel clone 17/3pc e' costituita dalla giunzione tra i satelliti centromerici I e II. Inoltre, la regione corrispondente al satellite I e' interrotta dall'inserzione di circa 3 Kb costituita da una Long Terminal Repeat (LTR) di 1,4 Kb descritta nel genoma bovino e da una regione di 1,6 Kb in cui e' stata identificata una Open reading frame (ORF) codificante per la trascrittasi inversa, una SINE bovina, denominata art2, ed una regione di 12 bp che, quando transfettata in cellule di mammifero, e' in grado di indurre amplificazione delle regioni contigue al suo sito di integrazione. Il sistema sperimentale sopra descritto e' potenzialmente utilizzabile per la costruzione di nuovi vettori per il trasferimento genico sia in vitro, sia in vivo