Dosage immunoenzymatique du virus de la mosaique du tabac dans differents tissus de tabac cultives in vitro

An immunoenzymatic assay (ELISA) has been used to measure the level of virus synthesis in callus, proliferating vegetative buds and rooted plantlets of tobacco (Nicotiana tabacum var. Samsun) cultured « in vitro » and infected by tobacco mosaic virus. The enzyme, coupled with TMV antibodies, was (3β-glucose oxidase : its high stability allows a long term storage of the conjugate. The tissue extracts were diluted so that the virus concentration ranged from 7 to 125 ng/ml (for linear response of standard) and virus levels were estimated by comparison with this standard curve. The amount of virus in buds and plantlets was respectively 20 and 40 times that in callus. This method gave reproducible results (variability less than 15 %), was very sensitive (down to 0.1 μg virus per gram fresh material is measurable) ; it could be a very helpful tool to study plant-virus interactions.

Une méthode immunoenzymatique (méthode ELISA de type sandwich) a été appliquée au dosage du virus de la mosaïque du tabac dans trois types de tissus de tabac (Nicotiana tabacum var. « Samsun ») infectés et cultivés « in vitro » : cals, bourgeons végétatifs en multiplication rapide et plantules enracinées. Les anticorps anti-VMT sont couplés avec la (3β-glucose oxydase : la grande stabilité de cette enzyme, peu utilisée jusqu’alors en virologie végétale, permet une conservation de longue durée du conjugué. Il existe, pour la courbe étalon, une linéarité entre 7 et 125 ng/ml de virus purifié, déterminant ainsi la zone de dosage. Dans nos conditions, la quantité minimale d’antigène que l’on peut doser est de l’ordre de 0,1 (μg de virus/g de matière fraîche et la reproductibilité des résultats est estimée à 15 p. 100. La teneur en antigène viral est respectivement 20 et 40 fois plus élevée dans les bourgeons et les plantules que dans les cals.