PURIFICACIÓN DE IgY CONTRA LA SUBUNIDAD NR3 DEL RECEPTOR NMDA DE CEREBRO DE RATA

Spanish; Castilian. Objetivo. Obtener anticuerpos tipo IgY contra péptidos sintéticos de las subunidades NR3A y NR3B del receptor NMDA de ratas, para reconocer y seguir la expresión de estas subunidades en extractos de cerebro de rata de diferentes edades. Materiales y métodos. Se diseñaron dos péptidos empleando los sistemas de la base de datos Entrez y el programa ClustalW-PBIL de alineamientos múltiples contra las subunidades NR3A y NR3B del receptor NMDA; una vez sintetizados por el método SSPS-fmoc fueron utilizados para inocular gallinas (Gallus gallus, variedad Hy Line Brown) de 16 semanas de edad; al cabo de 57 días postinoculación se purificó IgY específica y se enfrentaron a extractos de cerebro de rata postnatal y adulta. Resultados. Se detectaron las subunidades NR3A y NR3B y se relacionó su expresión con la edad del animal; siendo mayor la expresión de la subunidad NR3A en extracto de cerebro de rata postnatal. No se encontró diferencia marcada en la expresión de la subunidad NR3B en las edades mencionadas. Conclusiones. Esta es la primera investigación que emplea proteína nativa para el reconocimiento de la subunidad NR3 del receptor NMDA, lo cual muestra la especificidad de los anticuerpos generados y contribuye con el entendimiento de las funciones de este receptor y su relación con la regulación de la memoria espacial.

English. Objective. To obtain IgY antibodies against synthetic peptides of NR3A and NR3B subunits of the rat NMDA receptor, to recognize and follow the expression of these subunits in rat brain extract at different ages. Materials and methods. By using Entrez data base and ClustalW-PBIL program for sequence alignment two peptides against NR3A and NR3B subunits of the NMDA receptor were designed, Once synthesized by SSPS-fmoc method, peptides were then inoculated into 16-week-old chickens (Gallus gallus, var. Hy Line Brown). After 57 days specific IgY was purified and confronted with postnatal and adult rat brain extract. Results. Both subunits NR3A and NR3B were detected and their expression was related to rat age. The level of expression of NR3A was higher in postnatal rat brain extract; no marked differences in expression of NR3B were found for either age. Conclusions. This is the first research using native protein for recognition of the NR3 subunit of the NMDA receptor It shows the antibody specificity and contributes to understanding the receptor’s functions and its relation to spatial memory regulation.