Serina protoseas de Lachesis stenophrys y bothrops asper: Producción de anticuerpos mediante inmunización con ADN y subclonaje
2006
Madrigal-Villalobos, Marvin
Proyecto de Graduación (Bachillerato en Ingeniería en Biotecnología) Instituto Tecnológico de Costa Rica. Escuela de Biología, 2006.
Show more [+] Less [-]El veneno de vipéridos contiene componentes tóxicos de naturaleza enzimática, dentro de los cuales se destacan serina proteasas por su contribución a provocar un desbalance del sistema hemostático. La baja proporción de anticuerpos específicos para neutralizar toxinas de interés dentro de los sueros antiofídicos producidos de forma convencional, ha llevado a la obtención de los ADNc codificantes para diversas toxinas y su clonación en vectores de expresión, con el fin de producir anticuerpos específicos mediante inmunización con ADN. En esta investigación, se inmunizaron ratones vía intravenosa con el ADNc codificante para una serina proteasa del veneno de Lachesis stenophrys clonado en el plásmido pCI, y se realizó un subclonaje de una serina proteasa del veneno de Bothrops asper en el vector de expresión eucariota: pVAX1-UbC. Tras determinar el nivel de IgGs específicas para la serina proteasa de L. stenophrys en el suero de ratones inmunizados, se determinó la ausencia de una respuesta inmune específica mediante inmunización intravenosa, lo cual evidencia la necesidad de buscar nuevas estrategias para optimizar los constructos de ADN a ser utilizados. El subclonaje realizado constituye una de ellas, con el fin de estudiar a futuro el efecto regulador de un promotor muy conservado en mamíferos (el gen de la Ubiquitina C) sobre la expresión de la serina proteasa de B. asper.
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