Diseño y construcción de un vector de DsRNA específico tipo hairpin expresado en la cepa de Escherichia coli HT115 (DE3) contra WSSV en camarón Litopenaeus vannamei

The RNA interference technology has been considered as a possible solution to the White Spot Disease in shrimp farming, because of its efficacy to significantly reduce mortality in infected organisms. However, a limiting factor for the application of this technology is the production of dsRNA that traditionally is generated by techniques of transcription in vitro by commercial kits, nevertheless, are often laborious, consuming a lot time, are costly, production of dsRNA is limited for studies of RNAi, and considering the huge amount of organisms that are required to treat, this way of dsRNA production is not feasible. In this context, this present work focuses on building of the expression vector named pJC410 that is based in wsv151 gene of the WSSV virus. Using the E. coli strain HT115 (DE3) which is deficient in ribonuclease III activity. We have developed a bacterial expression system to produce dsRNA stably in vivo. This method involves a culture of E. coli HT115 (DE3) with construction pJC410 by conjugation, total RNA extraction using Trizol, and enzymatic treatments with RNAse A and DNAse I. This method provides an alternative to prepare large amounts of dsRNA it easier and less expensive than the traditional techniques of in vitro transcription, for a practical application in large-scale shrimp farming to combat the WSSV virus.

La tecnología del RNA de interferencia ha sido considerada como una posible solución para frenar la Enfermedad del Virus del Síndrome de la Mancha Blanca (WSSV) en el cultivo de camarón, debido a su efectividad para reducir significativamente la mortalidad en organismos infectados. Sin embargo, una limitante para la aplicación de esta tecnología es la producción de dsRNA, ya que tradicionalmente su síntesis se genera mediante técnicas de transcripción in vitro en kits comerciales, los cuales suelen ser laboriosos, consumen mucho tiempo, resultan costosas, la producción que se genera es limitada, entre otros. Por lo tanto, considerando la enorme cantidad de organismos que se requieren tratar, esta vía de producción de dsRNA no resulta viable. En este contexto, el presente trabajo se enfocó en construir el vector de expresión denominado pJC410 que se basa en el gen wsv151 del virus WSSV. Usando la cepa de Escherichia coli HT115 (DE3), la cual es deficiente en actividad ribonucleasa III, se desarrolló un sistema de expresión bacteriano para producir dsRNA in vivo de manera estable. Este método involucra un cultivo de E. coli conjugada con la construcción pJC410, extracción de RNA total mediante Trizol, y tratamientos enzimáticos con RNAsa A y DNAsa I. De esta manera resulta más fácil y menos costoso que las técnicas tradicionales de transcripción in vitro, proporcionando una alternativa para preparar grandes cantidades de dsRNA para una aplicación práctica a gran escala en el cultivo de camarón para controlar el virus WSSV.