Диагностические свойства синтетического антигена на основе иммуногенного эпитопа gp51 вируса лейкоза крупного рогатого скота | Diagnostic properties of a synthetic antigen based on the immunogenic epitope gp51 of the bovine leukemia virus

Russian. Диагностика лейкоза остается одной из ключевых проблем при проведении оздоровительных мероприятий в неблагополучных по данному заболеванию хозяйствах. Представлены разработка и изучение диагностических свойств синтетического пептида, представляющего собой аминокислотную последовательность эпитопов белка gp51 вируса лейкоза, в качестве антигена для ИФА при индикации данного возбудителя. По результатам сравнительного анализа иммуногенности эпитопов вирусных белков gp51, gp30 и p24 был отобран наиболее иммуногенный вариант – аминокислотная последовательность белка gp51 в позиции от 131 до 163 аа. На основе выбранной аминокислотной последовательности сконструирован синтетический пептид BLVpep, который характеризовался оптимальными физико-химическими показателями (растворимость, расчётные значения рН и изоэлектрической точки молекулы). При определении диагностических характеристик представленного выше пептида было установлено, что при использовании соответствующих конъюгатов BLVpep дифференцирует положительные сыворотки от BLV-отрицательных, а также сывороток крови здоровых и больных животных (кролика, овцы, козы, мыши, коз, больных артрит-энцефалитом (CAEV), и кошек, зараженных лейкозом (FeLV)). При определении чувствительности способа ИФА на основе BLVpep специфические антитела в положительных образцах выявлялись в разведении 1:1600. При исследовании 90 проб сывороток крови крупного рогатого скота продемонстрировано полное совпадение результатов ИФА на основе синтетического пептида и коммерческого набора. По результатам проведенного исследования показана возможность применения синтетического пептида BLVpep в диагностических серологических тестах.

English. Diagnosis of leukemia remains one of the key problems in carrying out recreational activities on farms that are disadvantaged by this disease. This work refers to development and study of the diagnostic properties of a synthetic peptide which is an amino acid sequence of epitopes of the gp51 protein of the leukemia virus as an antigen for ELISA in the indication of this pathogen. Based on the results of a comparative analysis of the immunogenicity of epitopes of the viral proteins gp51, gp30 and p24, the most immunogenic variant was selected - the amino acid sequence of the gp51 protein in positions from 131 to 163 aa. Based on the selected amino acid sequence, a synthetic peptide BLVpep was constructed which was characterized by optimal physicochemical parameters (solubility, calculated pH values and isoelectric point of the molecule). When determining the diagnostic characteristics of the peptide presented above, it was found that when using appropriate conjugates, BLVpep differentiates positive sera from BLV-negative as well as blood sera of healthy and sick animals (rabbit, sheep, goat, mouse, goats with arthritis encephalitis (CAEV) and cats infected with leukemia (FeLV)). When determining the sensitivity of the ELISA method based on BLVpep, specific antibodies in positive samples were detected at a dilution of 1:1600. In the study of 90 samples of bovine blood sera, a complete coincidence of the results of ELISA based on a synthetic peptide and a commercial kit was demonstrated. According to the results of the study, the possibility of using the synthetic peptide BLVpep in diagnostic serological tests is shown.