Hemocytes quantification in Rhipicephalus microplus engorged females infected by Beauveria bassiana s.l. | Quantificação de hemócitos em fêmeas ingurgitadas de Rhipicephalus micrplus infectadas por Beauveria bassiana s.l.

English. ABSTRACT. Freitas M.C., Coutinho-Rodrigues C.J.B., Perinotto W.M.S., Nogueira M.R.S., Chagas T.T., Marciano A.F., Camargo M.G., Quinelato S., Gôlo P.S., Sá F.A. & Bittencourt V.R.E.P.[Hemocytes quantification in Rhipicephalus microplus engorged females infected by Beauveria bassiana s.l.] Quantifica- ção de hemócitos em fêmeas ingurgitadas de Rhipicephalus microplus infectadas por Beauveria bassiana s.l. Revista Brasileira de Medicina Veterinária, 37(Supl.1):63- 70, 2015. Departamento de Parasitologia Animal, Instituto de Veterinária, Anexo 1, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Campus Seropédica, BR 465 Km 7, Seropédica, RJ 23897-970, Brasil. E-mail: [email protected] Rhipicephalus microplus tick is an ectoparasite with a great negative impact for veterinary medicine. Under massive infestations cattle may present severe anemia; besides that, ticks can transmit pathogenic agents causing host death. Among the methods used to alternatively control ticks is the use of the arthropodpathogenic fungus Beauveria bassiana s.l. that has been considered promising due to the fungus capacity of penetration of full cuticle in all tick developmental stages, colonizing them and causing tick death. Arthropod immune response is basically composed of humoral and cellular components. Several cell types that actively work against microbial infection are present within the hemolymph. The aim of the present study was to evaluate the amount and identify hemocytes present in the hemolymph of R. microplus engorged females artificially inoculated with B. bassiana senso latu (s.l.) conidia (isolate CG 206). Fungal suspension (1 × 108 conidia/mL) or Tween 0.01% (control group) were inoculated in R. microplus engorged females. Hemolymph collections were made through the female dorsal region (for quantitative analysis) and the distal section of the legs (for qualitative analysis) 24, 48 and 72 hours after fungal inoculation. Hemocytes quantification was performed using a Neubauer chamber. Qualitative analysis was carried out by a smear of hemolymph on slides. Data were submitted to Mann-Whitney test for comparison of averages on a significance level of 5% (p <0.05). Comparison between unexposed females and females exposed to B. bassiana s.l. showed that hemolymph from the fungus treated group presented significant reduced amount of hemocytes 24 hours after fungal inoculation. Total amount of hemocytes 48 hours after fungal inoculation was 49.5 times lower in comparison with the amount observed 24 after fungal exposure. The following hemocytes were identified in tick females’ hemolymph: prohemocytes, granulocytes, plasmatocytes, spherulocytes and possible oenocytoids. Based on these results, it is concluded that inoculation of B. bassiana s.l. isolate CG 206 caused cellular alteration in the hemolymph of R. microplus females showing reduction of total amount of hemocytes 48 hours after fungal inoculation.

Portuguese. O carrapato Rhipicephalus microplus é um ectoparasito de grande importância em medicina veterinária. Grandes infestações com este parasito podem levar os bovinos a quadros severos de anemia, além de serem transmissores de agentes patogênicos culminando até mesmo na morte do hospedeiro. Dentre os métodos utilizados no controle alternativo de carrapatos, os fungos artropodopatogênicos como Beauveria bassiana s.l. vêm se destacando, devido à capacidade de penetração via cutícula integra das diversas fases de desenvolvimento do carrapato colonizando-os e levando-os a morte. A resposta imune gerada pelos artrópodes é basicamente composta de uma parte humoral e outra de origem celular. Diversos tipos celulares que atuam ativamente frente à infecção por patógenos estão presentes na hemolinfa. O objetivo deste trabalho foi avaliar a quantidade, e identificar os hemócitos presentes na hemolinfa de fêmeas ingurgitadas de R. microplus infectadas artificialmente por inoculação de B. bassiana s.l. (isolado CG 206). Infecções artificiais foram feitas por inoculação de suspensão fúngica (1×108 conídios/mL) ou água destilada estéril e Tween 0,01% (grupo controle) em fêmeas ingurgitadas de R. microplus. Coletas de hemolinfa foram realizadas através da região dorsal das fêmeas (para análise quantitativa) e da secção distal das patas (para análise qualitativa) 24, 48 e 72 horas após inoculação do fungo. A quantificação dos hemócitos foi realizada com auxílio de câmara de Neubauer. A análise qualitativa dos hemócitos foi realizada através do esfregaço, em lâminas, de hemolinfa das fêmeas ingurgitadas com auxílio de microscópio óptico. Os dados obtidos foram submetidos ao teste Mann-Whitney para a compara- ção entre as médias em um nível de significância de 5% (p<0,05). Observou-se que a quantidade de hemócitos na hemolinfa das fêmeas dos grupos tratados com B. bassiana s.l. diminuiu significativamente quando comparado ao grupo controle, após 24 horas da inoculação fúngica. O número total de hemócitos do grupo 48 horas pós inoculação fúngica foi 49,5 vezes menor do que a quantidade observada 24 horas após inoculação. Foi possível identificar os seguintes hemócitos: pró hemócitos, granulócitos, plasmatócitos, esferulócitos e possí- veis oenocitóides. Baseando-se nos resultados obtidos conclui-se que a inoculação do isolado CG 206 de B. bassiana s.l. provocou uma alteração celular das fêmeas ingurgitadas do carrapato R. microplus através da redução do número total de hemócitos 48 horas após inoculação.