What is the most suitable hypoosmotic swelling test to assess functional integrity of cryopreserved equine sperm? | Qual é o teste hiposmótico mais indicado para avaliar a integridade funcional de espermatozoides equino criopreservados?

English. ABSTRACT. Snoeck P.P.N., Melo M.I.V., Alves S.G.G., Bittencourt R.F., Ribeiro Filho A.L., Chalhoub M. & Henry M. [What is the most suitable hypoosmotic swelling test to assess functional integrity of cryopreserved equine sperm?] Qual é o teste hiposmótico mais indicado para avaliar a integridade funcional de espermatozoides equino criopreservados? Revista Brasileira de Medicina Veterinária, 36(4):355-361, 2014. Departamento de Ciências Agrárias e Ambientais, Universidade Estadual de Santa Cruz, Rodovia Jorge Amado, Km 16, Salobrinho, Ilhéus, BA 45662-000, Brasil. E-mail: [email protected] The aim of this work was to standardize the most efficient hypoosmotic swelling test (HOST) to determine the percentage of functional integrity of cryopreserved equine sperm by testing protocols with different solutes and distilled water, different incubation times in water bath, osmolarities, dilution rates and with or without formol-saline fixation. In experiment 1 the sucrose, fructose, sodium chloride and sodium citrate solutions with 50 and 100 mOsmol/L and the distilled water were tested in the dilutions rate of 1:10 and 1:20, incubated in water bath for 10 and 15 minutes. The types of hypoosmotic reaction were evaluated in phase contrast microscopy. There were no differences (P≥0.05) between the incubation times, osmolarities of solutions, and dilution rates of the semen with distilled water. The fructose solution was more efficient to determine the percentage of reactive sperm (P≤0.05) than the sodium chloride and sodium citrate solutions, but was similar to sucrose and distilled water (P≥0.05). The test with distilled water identified the higher percentage of reactive sperm with strongly coiled tails compared to the tests with hypoosmotic solutions with 50 and 100mOsmol/L (P≤0.05). Experiment 2 tested the semen and distilled water dilutions to perform the HOST (1:5, 1:10, 1:15, 1:20 and 1:25). The 1:15 distilled water HOST was superior when compared to the other protocols (P≤0.05), and was similar to the 1:25 dilution protocol (P≥0.05). The effect of the saline-formol fixation was studied in experiment 3. The semen:distilled water dilution rate used was 1:15. After water bath incubation the sperm were immediately assessed or fixed for later analysis. There were no differences (P≥0.05) in the comparison between the fixed and non fixed protocol. The most efficient HOST to determine the percentage of functional integrity of cryopreserved equine sperm is carried out with 1:15 water distilled dilution (semen:distilled water), incubated for 10 minutes, fixed in saline-formol solution; the immediate reading is not necessary

Portuguese. Objetivou-se padronizar um teste hiposmótico (HOST) mais eficiente em determinar o percentual de espermatozoides equino funcionalmente íntegros após a criopreservação, testando protocolos com solutos diferentes e água destilada, diferentes tempos de incubação em banho-maria, osmolaridades, taxas de diluição e fixação ou não em formol salino. No experimento 1 foram testadas as soluções de sacarose, frutose, cloreto de sódio e citrato de sódio com 50 e 100mOsmol/L e a água destilada nas diluições de 1:10 e 1:20, incubadas em banho-maria por 10 e 15 minutos. Os tipos de reação hiposmótica foram avaliados em microscopia de contraste de fase. Não houve diferença (P≥0,05) entre os tempos de incubação, as osmolaridades das soluções e as taxas de diluições sêmen e água destilada estudadas. A solução de frutose foi mais eficiente em determinar o percentual de espermatozoides reativos (P≤0,05) do que as soluções de cloreto e citrato de sódio, mas foi semelhante à solução de sacarose e água destilada (P≥0,05). O teste com água destilada identificou o maior percentual de espermatozoides reativos com cauda fortemente enrolada comparada aos testes com soluções hiposmóticas com 50 e 100mOsmol/L (P≤0,05). No experimento 2 foram testadas diferentes diluições sêmen e água destilada para realizar o HOST (1:5, 1:10, 1:15, 1:20 e 1:25). O HOST com água destilada na diluição 1:15 apresentou superioridade quando comparado aos demais protocolos (P≤0,05) e foi semelhante ao protocolo de diluição 1:25 (P≥0,05). O efeito da fixação em formol salino tamponada foi estudado no experimento 3. A taxa de diluição sêmen:água destilada utilizada foi 1:15, após incubação em banho-maria, os espermatozoides foram avaliados imediatamente ou submetidos a fixação para posterior leitura. Não houve diferença (P≥0,05) na comparação entre os espermatozoides fixados e não fixados. O HOST mais eficiente em determinar o percentual de espermatozoides equino funcionalmente íntegros após a criopreservação é o realizado com água destilada na diluição 1:15 (sêmen: água destilada), incubado por 10 minutos, fixado em formol salino, não sendo necessário a leitura imediata.