Refreezing effect on the plasma membrane, morphology, viability and individual motility in bovine sperm | Efecto de la recongelación sobre la membrana plasmática, morfología, viabilidad y motilidad individual en los espermatozoides bovinos

English. Refreezing techniques allow other treatments to be given to the semen and achieve greater efficiency in animal reproduction, such as performing sexing techniques on previously frozen semen. The objective of this study was to evaluate the effect of the refreezing of bovine semen on the integrity of the plasma membrane, morphology, viability and individual motility. Semen from three Brahman bulls collected during three occasions (n = 9) was used, each with an electroejaculator. The ejaculates were frozen in liquid nitrogen (-196 ° C) using Triladyl® diluent. Three treatments were analyzed: Fresh Diluted Semen (FDS), Frozen Thawed Semen (FTS) and Frozen Thawed Re-frozen Semen (FTRS). Spermac (Minitube®) stains were applied for morphology, BLOM for viability and the HOST test (cell endosmosis) for plasma membrane integrity. There were significant differences (P≤0.05) between FDS, FTS and FTRS for the individual motility percentages (92.5%, 65.42% and 46.25%), percentage of live sperm (84.18%, 61.70% and 48.21%), percentage of normal sperm (97.60%, 95.97% and 93.46%) and percentage of sperm with positive endosmosis (82.50%, 50.13% and 31.58%) respectively. Under the conditions of this study, the re-freezing process of bovine semen decreases individual motility, viability and affects the integrity of the plasma membrane, however, it can be a viable alternative when applied only to ejaculates that have initially presented an individual motility when fresh ≥ 80%.

Spanish; Castilian. Las técnicas de recongelación permiten darle al semen otros tratamientos y lograr una mayor eficiencia en la reproducción animal, como realizar técnicas de sexado en semen previamente congelado. El objetivo de este estudio fue evaluar el efecto de la recongelación del semen bovino, sobre la integridad de la membrana plasmática, morfología, viabilidad y motilidad individual. Se utilizó semen de tres toros Brahman colectados en tres ocasiones (n=9) cada uno con electroeyaculador; los eyaculados fueron congelados en nitrógeno líquido (-196°C) utilizando el diluyente Triladyl®. Se analizaron tres tratamientos: Semen Fresco Diluido (SFD), Semen Congelado Descongelado (SCD) y Semen Congelado Descongelado Recongelado (SCDR). Se aplicaron las tinciones Spermac (Minitube®) para morfología, BLOM para viabilidad y la prueba de HOST (endósmosis celular) para integridad de membrana plasmática. Hubo diferencias significativas (P≤0.05) entre SFD, SCD y SCDR para los porcentajes de motilidad individual (92.5%, 65.42% y 46.25%), porcentaje de espermatozoides vivos (84.18%, 61.70% y 48.21%), porcentaje de espermatozoides normales (97.60%, 95.97% y 93.46%) y porcentaje de espermatozoides con endosmosis positiva (82.50%, 50.13% y 31.58%) respectivamente. Bajo las condiciones de este estudio, el proceso de recongelación del semen bovino disminuye la motilidad individual, la viabilidad y afecta la integridad de la membrana plasmática, sin embargo, puede ser una alternativa viable cuando es aplicado solo a eyaculados que hayan presentado inicialmente una motilidad individual en fresco ≥ 80%.