Tierartidentifizierung in Knochenmehl mittels MALDI/TOF-MS
2010
Bauer,J.
German. Ziel der Arbeit war es, eine Methode zu entwickeln, die eine Tierartdifferenzierung in Knochen und MBM ermöglicht. Da die Verfütterung von tierischem Protein nach VO 999/2001 europaweit verboten ist und die momentane Analytik nicht speziesgenau unterscheiden kann, ist es wünschenswert eine speziesspezifische Nachweismethode zu entwickeln. Als Potentieller Biomarker stand Osteocalcin zu Verfügung, das eine ausreichend variable Aminosäuresequenz zwischen den einzelnen Spezies hat.Osteocalcin wurde aus Knochenmehl und MBM extrahiert und mit Hilfe diverser Methoden aufgereinigt. Eine relativ einfache Screening-Methode ist die Aufreinigung des extrahierten OC aus Knochenmehl mittels ZipTip und direkte Messung des intakten Proteins mittels MALD-MS. Hier ist eine Unterscheidung zwischen Rind, Schwein und Huhn möglich. Weniger aussagekräftige Spektren werden mit der gleichen Methode bei Verwendung von MBM erhalten, da hier die alleinige Aufreinigung mittels ZipTip nicht ausreichend ist. Eine zweidimensionale HPLC (Ausschlusschromatographie und reversed phase-HPLC) sollten eine bessere Aufreinigung erzielen. Nach enzymatischem Verdau wurden die Fragmente im MALDI-MS analysiert und konnten den einzelnen Spezies zugeordnet werden. Die Detektion des N-terminalen Fragmentes, besonders beim Rind, hat sich jedoch als Herausforderung dargestellt, so dass weitere Untersuchungen bezüglich der Ursache nötig waren. Generell ist die Analyse von OC in Knochenmehl möglich, ein Wechsel zu MBM bereitet vor allem beim Rind Schwierigkeiten. Nur OC in Schweine-MBM konnte in guten Intensitäten mittels MALDI-MS detektiert werden.
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Bibliographic information
Publisher Humboldt Universität zu Berlin Mathematisch-Naturwissenschaftliche Fakultät I Institut für Chemie
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