Oxidative stress on alpaca epididimal sperm frozen with different concentrations of seminal plasma | Estrés oxidativo en espermatozoides epididimarios de alpaca criopreservados con diferentes concentraciones de plasma seminal

English. Objective. To assess the oxidative stress on alpaca epididimal sperm frozen with different concentration of seminal plasma. Materials and methods. 29 post mortem alpaca epididymis were used. Epididymal sperm were obteined thought cuts and suspended in a diluent based on skim milk, egg yolk and fructose and dimethylacetamine. Samples were separated into four aliquots which were supplied with seminal plasma (v/v) in concentrations of 0, 10, 25 and 50% respectively; then, sperm motility was assessed before freezing; then, motility was assessed before freezing with an automatic freezer machine. After thawing, mitochondrial membrane activity, sperm viability, lipid peroxidation and sperm apoptosis were assessed using flow cytometry with images. Results. Sperm exposed to 50% seminal plasma showed the lowest post-thaw motility (3.5±3.7%) and the highest percentages of apoptotic cells (71.43±20.6%). No significant differences were found in the rest of parameters. Conclusions. This study constitutes non-conclusive evidence that presence of seminal plasma does not affect viability, mitochondrial activity, or lipid peroxidation of alpaca epididymal sperm during cryopreservation processes; however, when it is absent or added up to 25% in the cryopreservation process, it may be possible to obtain better results in terms of sperm motility and sperm apoptosis.

Spanish; Castilian. Objetivo. Evaluar el estrés oxidativo en el espermatozoide epididimario de alpaca criopreservado con diferentes concentraciones de plasma seminal. Materiales y métodos. Se emplearon 29 epidídimos de alpaca obtenidos post mortem. Los espermatozoides epididimarios fueron recuperados mediante cortes en un dilutor a base de leche descremada, yema de huevo, fructosa y dimetilacetamina. A continuación, se procedió a separar las muestras en cuatro alícuotas y se agregó plasma seminal (v/v) en diferentes concentraciones (0, 10, 25 y 50%). Luego se evaluó la motilidad espermática y se congelaron mediante una congeladora automática. Al descongelamiento se evaluó motilidad progresiva, potencial de membrana mitocondrial, viabilidad espermática, peroxidación de lípidos y apoptosis espermática mediante citometría de flujo con imágenes. Resultados. Los espermatozoides expuestos a 50% de plasma seminal mostraron la motilidad post descongelamiento estadísticamente más baja (3.5±3.7%) y el porcentaje de células apoptóticas estadísticamente más alto (71.43±20.6%). En todas las demás variables, no se hallaron diferencias estadísticas significativas (p≤0.05). Conclusiones. Se obtiene evidencia no cocluyente de que la presencia del plasma seminal no afecta la viabilidad, la actividad mitocondrial,  ni la peroxidación lipídica de los espermatozoides epididimarios de alpaca durante el proceso de criopreservación; sin embargo, en ausencia de este o cuando es agregado hasta en un 25% en el proceso de criopreservación, es posible obtener mejores resultados en cuanto a motilidad espermática y apoptosis espermática.