INFLUENCE OF SEVERAL ANALYTICAL CONDITIONS ON WHOLE BLOOD CHOLINESTERASE ACTIVITY DETERMINATION BY ELLMAN METHOD | INFLUENCIA DE DIVERSAS CONDICIONES ANALÍTICAS EN LA DETERMINACIÓN DE COLINESTERASA EN SANGRE ENTERA MEDIANTE EL MÉTODO DE ELLMAN

English. The main sources of variation that can produce variability on whole blood cholinesterase determinations were studied and evaluated. For this purpose, dog whole blood aliquots were analyzed under different analytical conditions. An increase on cholinesterase activity was observed as reaction temperature was raised. The highest cholinesterase activity was obtained at pH range between 8.0 and 8.5; however, non-enzimatic substrate hydrolysis was also increased when pH exceeded 7.5, so the use of pH 7.5 would be recommended. Although acetylthiocholine iodide concentration of 5x10-3 M and butyrylthiocholine iodide concentration of 10x10-3 M yielded the highest cholinesterase activity, an increase of non-enzymatic substrate hydrolysis was also observed at these substrate concentrations, so the use of both substrates at 1x10-3 M concentration was preferred. 5,5’- dithiobis-2-nitrobenzoic acid as chromophore, and acetylthiocholine iodide and butyrylthiocholine iodide as substrates, were stable for at least three months if frozen. Based on these results, this work in contributing to a better knowledge of the sources of variation affecting whole blood cholinesterase determination, and the standardization of analytical conditions.

Spanish; Castilian. En este trabajo se pretende estudiar y evaluar las principales fuentes de variación que pueden provocar variabilidad en la determinación de colinesterasa en sangre entera. Para este fin se analizaron alícuotas de sangre entera de perro bajo distintas condiciones analíticas. Se observó un aumento de la actividad colinesterasa conforme se incrementó la temperatura de reacción. La mayor actividad colinesterasa se encontró en un intervalo de pH entre 8.0 y 8.5; sin embargo, una fuerte elevación de la hidrólisis no enzimática del sustrato tiene lugar cuando el pH excede de 7.5, lo que haría recomendable el empleo de pH 7.5. Aunque los valores más elevados de actividad se alcanzaron con una concentración del sustrato acetiltiocolina iodada de 5x10-3 M y de butiriltiocolina iodada de 10x10-3 M, se describió un fuerte aumento de la hidrólisis no enzimática de los sustratos a estas concentraciones, por lo que se prefirió emplear una concentración de ambos sustratos de 1x10-3 M. El cromóforo ácido 5,5’-ditiobis-2-nitrobenzoico, y los sustratos acetiltiocolina iodada y butiriltiocolina iodada, permanecieron estables al menos durante tres meses si eran conservados a una temperatura de –20ºC. Los datos aportados permitirán contribuir a un mejor conocimiento de las fuentes de variación que afectan a la determinación de colinesterasa en sangre entera, y a la estandarización de las condiciones analíticas utilizadas.