Using a multiplex PCR to differentiate between M. bovis BCG-vaccinated and pathogenic M. bovis-infected goats | Empleo de una PCR-multiplex para diferenciar caprinos vacunados con M. bovis BCG de infectados con M. bovis de campo

English. the ability of the Multiplex PCR diagnostic test to differentiate animals vaccinated with BCG from those infected with pathogenic Mycobacterium bovis. Nasal mucus, blood and organ tissue samples obtained from goats at necropsy, that had been either challenged with pathogenic M. bovis (Group 1, n=10), vaccinated with M. bovis-BCG/challenged with pathogenic M. bovis (Group 2, n=10), or vaccinated with M. bovis-BCG only (Group 3, n=4). All samples were analyzed using both the Multiplex PCR, and bacteriological culture. Blood and nasal mucus cultures were negative at all times, but the challenge strain was isolated from organ samples obtained post-mortem from Groups 1 and 2 (19/20). Negative results were obtained from the Multiplex PCR of nasal mucus samples obtained prior to challenge. A 150 bp amplification product -characteristic of pathogenic M. bovis- was obtained from 4 group-1 animals on d 60, and from 6 Group-1 animals on d 90. With the DNA from the cultures of Groups 1 and 2, amplification of pathogenic M. bovis was observed. None of the amplification products corresponded to M. bovis-BCG, confirming that the vaccine strain does not spread by either blood or nasal mucus. The use of Multiplex PCR in biologic samples (i.e. nasal mucus]) allowed distinguishing BCG-vaccinated animals from infected animals.

Spanish; Castilian. El objetivo del trabajo fue determinar la capacidad de la prueba diagnóstica de PCR-Multiplex para diferenciar animales vacunados con BCG de los infectados con Mycobacterium bovis patógena. Se trabajó con muestras de moco nasal, sangre y órganos obtenidos en la necropsia de caprinos desafiados con M. bovis patógena (Grupo 1 n=10), vacunados con M. bovis-BCG y desafiados con M. bovis patógena (Grupo 2 n=10), y solamente vacunados con M. bovis-BCG (Grupo 3 n=4). Todas las muestras se analizaron con los métodos de PCR-Multiplex y cultivo bacteriológico. El cultivo bacteriológico de la sangre y moco nasal fue siempre negativo, pero en las muestras de los grupos 1 y 2 obtenidas en la necropsia, se aisló la cepa de desafío (19/20). En las muestras de moco nasal obtenidas antes del desafío los resultados de la PCR-Multiplex fueron negativos, después del desafío, se obtuvo un producto de amplificación de 150 pb característico de M. bovis patógeno, de cuatro animales del Grupo 1 al día 60, y de seis animales del mismo grupo al día 90. Con el ADN obtenido del cultivo bacteriológico de los grupos 1 y 2 se observó amplificación de M. bovis patógeno. Ninguno de los productos de amplificación correspondió a M. bovis-BCG, lo que confirma que la cepa vacunal no se disemina por sangre y tampoco se elimina por moco nasal. El empleo de la PCR-Multiplex en muestras biológicas como moco nasal, permitió distinguir a los animales vacunados con BCG de los infectados.