Identification of Brucella ovis-specific proteins of 35 and 38 Kda | Identificación de las proteínas de 35 y 38 Kda específicas de Brucella ovis

English. The immunoblotting technique has been used as an ancillary test in the diagnosis of Brucella ovis. The diagnosis is corroborated with complement fixation (CF), double agar gel immunodiffusion (DAGID), and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). B. ovis hot saline (HS) extract has become the most popular antigen for these tests. Nevertheless, high degree of similarity has been observed between the protein bands from B. ovis and B. melitensis, resulting in serological cross reactions. This interferes with the diagnosis. The objective of this research was, therefore, identifying B. ovis-specific proteins and evaluating their antigenicity pattern by immunoblotting. B. ovis, B. melitensis, M. haemolytica, A. seminis, and H. somnus strains were used. Cellular fractions (outer membrane, inner membrane, and cytosol) from B. ovis Reo 198 strain, and B. melitensis 16M strain were obtained. Proteins were quantified, and then PAGE-SDS electrophoresis of both cellular fractions and whole extracts from all organisms was performed. Proteins were transferred to nitrocellulose membranes, and then treated with B. ovis hyperimmune serum. Three B. ovis-specific recognition bands (35, 38, and 81 kDa) -that were not found in B. melitensis or any of the other organisms- were identified. These proteins could be used in the diagnosis of B. ovis-caused epididymitis and, once properly standardized, they could have higher sensitivity/specificity for both DAGID and CF.

Spanish; Castilian. La técnica de inmunotransferencia se ha utilizado como prueba auxiliar para el diagnóstico de Brucella ovis, corroborando el diagnóstico con fijación de complemento (FC), inmunodifusión doble en agar (IDG) y el ensayo inmunoenzimático (ELISA). El extracto salino caliente (HS) de B. ovis, es el antígeno que más se ha utilizado en estas pruebas, sin embargo, se ha observado gran similitud entre las bandas proteicas de B. ovis y B. melitensis, existiendo con esto una reacción cruzada con sueros contra B. melitensis, lo que interfiere con el diagnóstico. Por ello, el objetivo fue identificar proteínas específicas de B. ovis, y evaluar el patrón de antigenicidad por inmunotransferencia. Se utilizaron cepas de B. ovis, B. melitensis, M. haemolytica, A. seminis y H. somnus. De las cepas de B. ovis Reo 198 y de B. melitensis 16M, se obtuvieron las fracciones celulares (membrana externa, interna y citosol). Se cuantificaron proteínas y se realizó la electroforesis PAGE-SDS de las fracciones celulares y de los extractos totales de todos los microorganismos. Las proteínas fueron transferidas a membranas de nitrocelulosa, y tratadas con suero hiperinmune contra B. ovis. Se identificaron tres bandas de reconocimiento, de 35, 38 y 81 kDa específicas de B. ovis, que no aparecieron en B. melitensis, ni en los demás microorganismos. Estas proteínas podrían ser utilizadas en el diagnóstico de la epididimitis por B. ovis, y debidamente estandarizada, presentar una sensibilidad y especificidad superior a inmunodifusión doble en agar o a fijación de complemento.