Microdisección por captura láser de Vibrio splendidus de Haliotis rufescens durante un episodio de mortalidad post-desove, un método alternativo para el estudio de enfermedades en acuicultura | Laser Capture Microdissection of Vibrio splendidus from Haliotis rufescens during a post-spawning mortality episode, an alternative method for the study of diseases in aquaculture

English. El examen histopatológico permite la observación directa de la estructura del tejido, la presencia de patógenos y su asociación con alteraciones celulares y tisulares; sin embargo, es casi imposible aislar e identificar estos microorganismos de preparaciones histológicas. El advenimiento de las tecnologías de microdisección por captura láser (LCM) en conjunto con herramientas moleculares se está utilizando actualmente para estudios genómicos, transcriptómicos y proteómicos en patología y parasitología humana y veterinaria. Una combinación de estas técnicas se puede utilizar para identificar un agente patógeno particular. Sin embargo, este innovador enfoque rara vez se ha utilizado para el estudio de patógenos en organismos acuáticos. Se llevó a cabo un análisis clínico, histológico, LCM, PCR, secuenciación Sanger y bacteriología convencional de abulones rojos, Haliotis rufescens, de un stock de reproductores que padecían un evento de mortalidad después del desove. En todos los casos el análisis clínico mostró hinchazón de los tejidos musculares, de la masa visceral y producción excesiva de moco. El análisis histopatológico mostró bacterias, con forma de bacilo curvado, que afectaban los tejidos musculares alrededor de la boca, la cabeza, el músculo del pie y el endotelio de los vasos hemolinfáticos. El análisis por LCM, PCR y secuenciación Sanger permitió identificar a las bacterias en los tejidos afectados como Vibrio splendidus. Por otra parte, el análisis bacteriológico y molecular convencional de una submuestra de la cabeza y músculo de uno de estos abulones permitió aislar e identificar a las siguientes especies: V. splendidus, V. chagasii, V. mediterranei, Vibrio sp. y Pseudoalteromonas sp. La tecnología LCM permitió la detección de las especies bacterianas proliferando en los tejidos y permitió su diferenciación de aquellas aisladas de los tejidos frescos completos. Esta combinación de técnicas modernas ayuda a definir qué bacterias deben seleccionarse para realizar los postulados de Koch y establecer su papel en el desarrollo de una enfermedad y/o evento de mortalidad. Los resultados obtenidos sugieren un estudio detallado sobre el papel de V. splendidus en eventos de mortalidades post desove en H. rufescens.

Spanish; Castilian. Histopathological examination allows direct observation of tissue structure, the presence of pathogens, and their association with cellular and tissue alterations; however, it is almost impossible to isolate and identify these microorganisms from histological preparations. The advent of laser capture microdissection (LCM) technologies in conjunction with molecular tools is currently being used for genomic, transcriptomic, and proteomic studies in human and veterinary pathology and parasitology. A combination of these techniques may be used to identify a particular pathogen. However, this innovative approach has rarely been used to study pathogens in aquatic organisms. Clinical, histological, LCM, PCR, Sanger sequencing, and conventional bacteriological analysis of red abalones, Haliotis rufescens, from a broodstock suffering from a post-spawning mortality event were carried out. In all cases, the clinical analysis showed swelling of muscle tissues, visceral mass and excessive mucus production. The histopathological analyses showed curved rod-shaped bacteria affecting the muscle tissues around the mouth, head, foot muscle, and endothelium of haemolymphatic vessels. Analysis by LCM, PCR, and Sanger sequencing allowed the bacteria in the affected tissues to be identified as Vibrio splendidus. On the other hand, conventional bacteriological and molecular analysis of a subsample of the head and muscle of one of these abalones allowed the following species to be isolated and identified: V. splendidus, V. chagasii, V. mediterranei, Vibrio sp., and Pseudoalteromonas sp. LCM technology allowed the detection of the bacterial species proliferating in the tissues and allowed their differentiation from those isolated from whole fresh tissues. This combination of modern techniques helps to define which bacteria should be selected to carry out Koch's postulates and to establish their role in the development of a disease and/or mortality event. The results suggest a detailed study on the role of V. splendidus in post-spawning mortality events in H. rufescens.