Comparison between glycerol and dimethylformamide in the cryopreservation of llama semen (Lama glama) | Evaluación de dos concentraciones de glicerol y dimetilformamida en la criopreservación de semen de llama (Lama glama)

English. The objective of this study was to evaluate the effect of two concentrations of glycerol (5% and 7%) and dimethylformamide (DMF; 7% and 9%) on the successful cryopreservation of llama semen collected by electroejaculation (EE). Sixteen ejaculates were obtained from eight adult males (4-7 years old). Semen samples were incubated with papain for 20 min to reduce viscosity, and the enzymatic action was subsequently inhibited before fresh evaluation. Samples were diluted in a Tris-based medium and gradually cooled to 5 °C over 2.5 h. They were then divided into four aliquots for cryoprotectant addition, evaluated during the cooling phase, packaged in straws, frozen within 25 min, and stored for 7 days prior to thawing. Sperm analysis was performed using a CASA-Mot system (ISAS®), assessing total motility (TM), kinematic parameters, sperm viability, and acrosomal integrity in fresh (papain-incubated), cooled, and thawed samples. Data was analyzed using a randomized complete block design, with mean comparisons performed by Tukey’s test (p<0.05). Results showed that TM, viability, and acrosomal integrity were significantly higher (p<0.05) in fresh semen compared to samples treated with glycerol or DMF during the cooling and post-thaw stages. Moreover, curvilinear velocity and amplitude of lateral head displacement were higher in fresh semen and in samples treated with 5% and 7% glycerol during cooling. In conclusion, none of the evaluated concentrations of glycerol or DMF effectively preserved sperm parameters after cryopreservation.

Spanish; Castilian. El objetivo del presente estudio fue evaluar el efecto de dos concentraciones de glicerol (5 y 7%) y de dimetilformamida (DMF; 7 y 9%) en la criopreservación del semen de llama colectado por electroeyaculación (EE). Se colectaron 16 eyaculados de 8 llamas machos adultos de 4 a 7 años de edad. Las muestras seminales fueron incubadas con papaína por 20 minutos para reducir la filancia, luego de inhibir la acción de la enzima se evaluaron en fresco. Posteriormente las muestras se diluyeron en un medio base Tris y se enfriaron gradualmente hasta 5 °C durante 2,5 horas. Se dividieron en cuatro alícuotas para la adición de los crioprotectores, se evaluaron en la etapa de refrigeración y empajuelado. La congelación se efectuó en 25 minutos, y las pajuelas fueron almacenadas por 7 días antes de su descongelación. El análisis espermático se realizó mediante un sistema CASA-Mot (ISAS®), determinando movilidad total (MT), parámetros cinemáticos de movilidad, porcentaje de espermatozoides vivos y con integridad acrosomal en semen fresco incubado con papaína, y en las muestras refrigeradas y descongeladas. El análisis estadístico se realizó con un diseño de bloques completos al azar, utilizando la prueba de Tukey para la comparación de medias (p<0,05). Los resultados mostraron que la MT, la viabilidad espermática y la integridad acrosomal fueron significativamente superiores (p<0,05) en el semen fresco respecto a las muestras con glicerol y DMF en las etapas de refrigeración y luego del descongelado. Asimismo, la velocidad curvilínea y amplitud del desplazamiento lateral de la cabeza presentaron valores mayores en el semen fresco y en las muestras con glicerol (5% y 7%) en la etapa de refrigeración. En conclusión, ninguno de los niveles evaluados de glicerol ni DMF logró preservar adecuadamente los parámetros microscópicos espermáticos tras la criopreservación.