Biotechnology methods in virus-free chrysanthemum varieties production | Биотехнология получения безвирусных сортов хризантемы

English. The paper considers the development of optimal conditions for the production of virus-free regenerants of Chrysanthemum spp. for further reproduction under in vitro conditions. The studies were conducted in 2021–2022. The object was chrysanthemum varieties of different taxonomic ranks: Ch. morifolium, Ch. multiflora and Ch. koreanum, which are affected by chrysanthemum virus B (CVB). Microcuttings with a bud were used as explants. At the stages of clonal micropropagation, the following nutrient media were used: MS + 0.5 mg/l of BAP (in vitro culture) and MS + 0.2 mg/l of kinetin + 0.05 mg/l of IBA (multiplication). The DAS-ELISA method was used to diagnose grafters and retest regenerants for the absence of CVB virus. The testing of regenerants for the presence of endophytic microflora was carried out on a Viss provocation nutrient medium. The effect of exposure time of the sterilant – lysoformin-3000 on the possibility of obtaining aseptic explants was conducted. It was found that treatment with 70 % ethanol (10 seconds) and effect of 2 % lysoformin solution for 10 minutes produces the maximum number of viable explants from 63.3 to 76.7 %, depending on the variety. The data on the effect of high temperature (37 °C) for 1–12 weeks on chrysanthemum plants are presented. A negative correlation was established (r = –0.84…–0.97) of the duration of thermotherapy with the regenerative ability of explants. The possibility of eradication of chrysanthemum plants, both against bacterial and viral infection is shown. An exposure of 9 weeks was noted, at which the rate of regeneration varies from 11.1 to 23.1 % relative to the control, while the efficiency of the recovery is maximum – 100 %.

Russian. Статья посвящена разработке оптимальных условий для получения безвирусных регенерантов Chrysanthemum spp. для дальнейшего размножения в условиях in vitro. Исследования проводили в 2021–2022 гг. Объектом служили сорта хризантем разных таксономических групп: Ch. morifolium, Ch. multiflora и Ch. koreanum, пораженных вирусом хризантемы В (CVB). В качестве эксплантов использовали микрочеренки с почкой. На этапах клонального микроразмножения использовали питательные среды МС + 0,5 мг/л БАП (введение в культуру in vitro) и МС + 0,2 мг/л кинетина + 0,05 мг/л ИМК (мультипликация). Для диагностики маточных растений и ретестирования регенерантов на отсутствие вируса CVB использовали метод DAS-ELISA; тестирование регенерантов на наличие эндофитной микрофлоры проводили на провокационной питательной среде Viss. Проведена оценка влияния времени экспозиции стерилизующего агента – лизоформина-3000 на возможность получения асептических эксплантов. Установлено, что обработка 70%-м этанолом (10 с) и действие 2%-го раствора лизоформина в течение 10 мин позволяет получить максимальное количество жизнеспособных эксплантов – от 63,3 до 76,7 % в зависимости от сорта. Приведены данные влияния высокой температуры (37 °С) в течение 1–12 недель на растения хризантемы. Установлена отрицательная корреляция (r = –0,84…–0,97) продолжительности термотерапии с регенерационной способностью эксплантов. Показана возможность освобождения растений хризантемы как от бактериальной инфекции, так и от вирусной. Отмечена экспозиция – 9 недель, при которой уровень регенерации варьирует от 11,1 до 23,1 % относительно контроля, при этом эффективность оздоровления максимальная и составляет 100 %.