Desenvolvimento de uma reação em cadeia pela polimerase e comparação com a imunodifusão em gel de agar na detecção de infecções pelo vírus da leucemia bovina | Development of a polymerase chain reaction and its comparison with agar gel immunodiffusion test in the detection of bovine leukemia virus infection

Portuguese. A reação em cadeia pela polimerase (PCR) foi utilizada para a detecção do vírus da leucemia bovina (VLB) em leucócitos periféricos de bovinos infectados. Os iniciadores utilizados foram construídos para amplificar uma parte do gene env do VLB. Os produtos da PCR foram analisados por eletroforese em gel de agarose corados por brometo de etídeo. A especificidade analítica da PCR foi confirmada por restrição enzimática dos produtos da reação com Bam HI e também pela análise da seqüência de três amostras. Sessenta e cinco animais foram testados para a presença de anticorpos anti-VLB, pela imunodifusão em gel de agar (IDGA) e pela PCR, para detecção direta do VLB. Houve 73,80% de concordância entre os dois testes. Quatro animais positivos na IDGA foram PCR negativos, enquanto 13 animais negativos na IDGA foram positivos na PCR. A sensibilidade diagnóstica obtida foi de 0,87 e a especificidade diagnóstica 0,62. A PCR desenvolvida pode ser uma ferramenta complementar no diagnóstico de infecções causadas pelo VLB, mas deve ter sua sensibilidade diagnóstica melhorada.

English. Polymerase chain reaction (PCR) was used for bovine leukemia virus (BLV) detection in the peripheral leukocytes of the infected bovines. The primers used were designed to amplify a part of env gene of BLV. PCR products were analyzed by agarose gel electrophoresis stained by ethidium bromide. The analytical specificity of PCR was confirmed by enzymatic restriction analysis of the PCR product with Bam HI and also by nucleotide sequence analysis of three PCR samples. Sixty five animals were tested for anti-BLV antibody, by agar gel-immunodiffusion test (AGID) and for direct BLV detection by PCR. There was a 73.80% concordance rate between the two tests. Four animals positive in AGID were PCR negative, while 13 AGID negative animals were found PCR positive. PCR got a 0.87 diagnosis sensitivity and 0.62 specificity. The developed PCR may be complementary tool in the diagnosis of BLV infection, but should have it diagnosis sensitivity improved.