Diagnóstico molecular de Leptospira spp em matrizes suínas descartadas | Molecular diagnosis of Leptospira spp. in culled sows

Portuguese. O Diagnóstico de leptospirose foi efetuado através de método molecular, histopatológico e sorológico em 30 matrizes suínas, descartadas, no Rio Grande do Sul, Brasil. Os objetivos foram comparar a eficiência dos 3 métodos, verificar a sensibilidade de um método de PCR que utiliza um primer único baseado na seqüência de um elemento repetitivo do genoma de Leptospira interrogans, bem como verificar a possível detecção de leptospiras em vários tecidos, incluindo o trato genital. Os animais foram selecionados com base no teste de aglutinação microscópica para incluir tanto animais negativos como positivos e com baixos e altos títulos sorológicos. As maiores freqüências (90 % dos aniamis positivos) e títulos (100 to 800) foram observados para L. interrogans serovar bratislava. Leptospiras foram detectadas por histopatologia em apenas 9 matrizes, todas com altos títulos (pelo menos 100). Um produto de PCR de 438 bp foi observado em todos os animais (fragmentos de 25 rins, 24 úteros e 9 ovidutos). Produtos de PCR similares foram obtidos em DNA de culturas de leptospiras patogênicas, enquanto a não patogênica, L. patoc apresentou um padrão distinto. Nenhum produto de amplificação de DNA de Leptospira spp foi detectado em DNA de culturas de Escherichia coli, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella sp, Streptococcus sp and Staphylococcus aureus, ou de sangue de dois leitões. O método molecular foi, assim, específico e o mais eficiente para detectar baixos níveis de patógeno, sendo capaz de diferenciar leptospiras patogênicas e não patogênicas.

English. Leptospirosis diagnosis was performed through molecular, histopathological and serological tests in 30 culled sows in Rio Grande do Sul, Brazil. The objectives were to compare the efficiency of the three methods, to verify the sensitivity of a PCR methodology using a single primer based on the sequence of a repetitive element of Leptospira interrogans genome, as well as to verify the possible detection of Leptospira in several tissue including the genital tract of sows. The animals were selected based on the microscopic agglutination test in order to have sows with negative and positive results, presenting low and higher serologic titers. The higher frequency (90 % of the positive sows) and titers (100 to 800) was observed for L. interrogans serovar bratislava. Leptospira was detected by histopathology in nine sows only, all presenting higher serologic titers (at least 100). A PCR product of 438 bp was observed in all animals (25 kidneys, 24 uterus and 9 oviduct) fragments. Similar PCR product was obtained for DNA from cultures of other pathogenic leptospires, while the pattern observed for the non-pathogenic L. patoc was distinct. No Leptospira spp DNA amplification product was detected in Escherichia coli, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella sp, Streptococcus sp and Staphylococcus aureus DNAs obtained from cultures, or in blood DNA samples of two piglets. The molecular system was therefore specific and the most effective to detect low pathogen levels, being able to differentiate pathogenic from non-pathogenic leptospires.