DEVELOPMENT OF METHOD FOR DETERMINATION THE TOTAL FLAVONOIDS IN SOPHORA JAPONICA FRUITS | РАЗРАБОТКА МЕТОДИКИ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУММЫ ФЛАВОНОИДОВ В ПЛОДАХ СОФОРЫ ЯПОНСКОЙ

English. Japanese sophora (Sophora japonica L., Fabaceae family) is a unique source of biologically active compounds of natural origin, including flavonoids. In scientific medicine, flowers and fruits of Sophora japonica are used to obtain medicinal herbal preparations. In the flowers of this plant, the dominant flavonoid is rutin (3-O-rutinoside of quercetin), whose content reaches 20–30%. In the fruits of Sophora japonica, the predominant flavonoids are isoflavone glycoside sophoricoside (4’-O-β-D-glucopyranoside of genistein) and flavone derivative kaempferol-3-O-sophoroside. Rutin, as a pharmaceutical substance with an angioprotective effect, is widely used for the production of combined medicines. The flavonoids of the fruits of Sophora japonica have bactericidal, anti-inflammatory, wound-healing activity and are used to produce tinctures. The purpose of this study is to develop a technique for quantifying the amount of flavonoids in the fruits of Sophora japonica. The XV edition of the State Pharmacopoeia of the Russian Federation includes a pharmacopoeia article on raw materials «Sophora japonica fruits» FS.2.5.0130 (instead of FS 42-452-72), according to which the identification of fruits of this plant is carried out by determination of the main groups of biologically active substances by thin-layer chromatography relative to the pharmacopoeial standard sample of sophoricoside. The section «Quantitative determination» of this pharmacopoeia article provides for the determination of the total of phenolic compounds by direct spectrophotometry at an analytical wavelength of 260 nm calculated on genistein (5,7,4'-trihydroxyisoflavone). In our opinion, this technique is not selective enough, since the fruits of Sophora japonica, along with flavonoids, contain phenolic compounds such as chlorogenic, caffeic and gallic acids, which differ in spectral characteristics from flavonoids. In addition, the calculation of the amount of phenolic compounds is carried out on genistein, which has an aglycone nature, while flavonoid glycosides predominate in the fruits of Sophora japonica. As a result of the conducted research, it is proved that for the purposes of standardization of the fruits of Sophora Japonica, it is advisable to use differential spectrophotometry, which allows more selectively determination of the content of the total flavonoids. A technique has been developed for the quantitative determination of the total flavonoids in the fruits of Sophora japonica by differential spectrophotometry at an analytical wavelength of 400 nm using a pharmacopoeial standard sample of cynaroside (3-O-β-D-glucopyranoside of luteolin) having similar spectral characteristics with flavonoids of this raw material (flavone derivatives). It was determined that the content of the total flavonoids in the fruits of Sophora japonica varies from 8.52±0.21 to 13.45±0.33% (calculated on cynaroside). The error of a single determination of the total flavonoids in the fruits of Sophora japonica with a 95% confidence probability is ±2.48%.

Russian. Софора японская (Sophora japonica L., сем. Бобовые – Fabaceae) – уникальный источник получения биологически активных соединений природного происхождения, в том числе флавоноидов. В научной медицине для получения лекарственных растительных препаратов используются цветки и плоды софоры японской. В цветках данного растения доминирующим флавоноидом является рутин (3-О-рутинозид кверцетина), содержание которого достигает 20–30%. В плодах софоры японской преобладающими флавоноидами являются изофлавоновый гликозид – софорикозид (4’-О-β-D-глюкопиранозид генистеина) и производное флавона – кемпферол-3-О-софорозид. Рутин как фармацевтическая субстанция, обладающая ангиопротекторным действием, широко используется для производства комбинированных лекарственных средств. Флавоноиды плодов софоры японской обладают бактерицидной, противовоспалительной, ранозаживляющей активностью и используются для получения настойки. Цель настоящего исследования – разработка методики количественного определения суммы флавоноидов в плодах софоры японской. В Государственную фармакопею Российской Федерации XV издания включена фармакопейная статья на сырье «Софоры японской плоды» ФС.2.5.0130 (взамен ФС 42-452-72), в соответствии с которой идентификацию плодов данного растения проводят путем определения основных групп биологически активных веществ методом тонкослойной хроматографии относительно фармакопейного стандартного образца софорикозида. В разделе «Количественное определение» данной фармакопейной статьи предусмотрено определение суммы фенольных соединений методом прямой спектрофотометрии при аналитической длине волны 260 нм в пересчете на генистеин (5,7,4’-тригидроксиизофлавон). На наш взгляд, данная методика недостаточно селективна, так как в плодах софоры японской наряду с флавоноидами содержатся такие фенольные соединения, как хлорогеновая, кофейная и галловая кислоты, которые по спектральным характеристикам отличаются от флавоноидов. Кроме того, расчет содержания суммы фенольных соединений осуществляют на генистеин, имеющий агликоновую природу, в то время как в плодах софоры японской преобладают флавоноидные гликозиды. В результате проведенных исследований обосновано, что для целей стандартизации плодов софоры японской целесообразно использование дифференциальной спектрофотометрии, позволяющей более селективно определять содержание суммы флавоноидов. Разработана методика количественного определения содержания суммы флавоноидов в плодах софоры японской методом дифференциальной спектрофотометрии при аналитической длине волны 400 нм с использованием фармакопейного стандартного образца цинарозида (3-О-β-D-глюкопиранозид лютеолина), имеющего близкие спектральные характеристики с флавоноидами данного сырья (производные флавонов). Определено, что содержание суммы флавоноидов в плодах софоры японской варьирует от 8.52±0.21 до 13.45±0.33% (в пересчете на цинарозид). Ошибка единичного определения содержания суммы флавоноидов в плодах софоры японской с доверительной вероятностью 95% составляет ±2.48%.