Adaptation of a bovine cell line in an optimized way for diagnosing Lentivirus capartenc | Adaptação de linhagem celular bovina de forma otimizada para diagnóstico de Lentivirus capartenc

English. Goat farming is a significant economic activity in the semi-arid northeastern region of Brazil, and an infectious disease that significantly affects dairy goat farming is Lentivirus capartenc, known previously as Caprine arthritis encephalitis virus (CAEV). The objective of this research was to evaluate the efficiency and specificity of an Agar Gel Immunodiffusion (AGID) test with CAEV antigens produced through untreated and detergent-treated bovine cells and compare it with the CAE-AGID -Biovetech® commercial test. Culture of primary bovine ear (CFBov) cells was propagated at a concentration of 4x104 cells/mL and incubated at 37°C. To evaluate the treatments of bovine cells, 270 samples of goat serum from herds in the state of Pernambuco were used and tested against 30 μL of each detergent for the possible diagnosis of Lentivirus capartenc. Two hundred seventy goat serum samples from herds in Pernambuco state were used, and 30 μL were tested against each detergent. For viral particle production, CFBov were inoculated with 0.5 mL of CAEV Cork viral sample with a titer of 10-4.5 for 30 min. After 30 min of adsorption, supplementation was performed with DMEM containing 2% Fetal Bovine Serum (FBS). The culture supernatant was collected and frozen, and then concentrated using PEG 6,000. Afterwards, concentrate was submitted to treatment with the following detergents: 0.1% Triton X-100, 0.1% SDS, 0.1% Tween 20. Antigens were evaluated by specific line production in Agar Gel Immunodiffusion (AGID). Positive serum from the CAE Diagnostic Kit (AGID) was used as a control. The results were evaluated at 94.7% sensitivity and 99.6% specificity for pure antigen, 97.4% sensitivity and 98.7% specificity for SDS, 97.2% sensitivity and 98.7% specificity for Triton X-100, and 97.3% sensitivity and 99.1% specificity for Tween 20. The CFBov cell line has been cultured for over 3 years, with more than 40 passages, and has shown no noticeable change in morphology or cell multiplication rate. The study shows that the use of treatment in bovine cells with SDS, Triton 100, and Tween 20 improved sensitivity and efficiency of the test for detecting Lentivirus capartenc.

Portuguese. A caprinocultura é uma importante atividade econômica para a região semiárida do nordeste do Brasil, e uma doença infecciosa que afeta significativamente a caprinocultura leiteira é o Lentivirus capartenc, anteriormente conhecido como Vírus da Artrite Encefalite Caprina (CAEV). O objetivo desta pesquisa foi avaliar a eficiência e especificidade de um teste de imunodifusão em gel de ágar (IDGA) com antígenos de CAEV produzidos por meio de células bovinas não tratadas e tratadas com detergente e compará-lo com o teste comercial CAE-IDGA -Biovetech®. A cultura de células primárias de orelha bovina (CFBov) foi crescida a uma concentração de 4x104 células/mL e incubada a 37°C. Para avaliação dos tratamentos das células bovinas, foram utilizadas 270 amostras de soro caprino de rebanhos do estado de Pernambuco e testados contra 30μL de cada detergente para o possível diagnóstico de Lentivirus capartenc. Para produção de partículas virais, os CFBov foram inoculados com 0,5mL de amostra viral CAEV Cork com título de 10-4,5 por 30 minutos. Após 30 minutos de adsorção foi realizada suplementação com DMEM contendo 2% de Soro Fetal Bovino (FBS). O sobrenadante das culturas foi coletado, congelado e, posteriormente submetido à concentração de antígeno utilizando PEG 6.000. Posteriormente, o concentrado foi submetido ao tratamento com os seguintes detergentes: Triton X-100 0,1%, SDS 0,1%, Tween 20 0,1%. Os antígenos foram avaliados pela produção de linhagens específicas na Técnica de Imunodifusão em Gel de Agar (IDGA). O soro positivo do kit de diagnóstico para Lentivirus capartenc (IDGA) foi utilizado como controle. Os resultados avaliados foram sensibilidade de 94,7% e especificidade de 99,6% para antígeno puro; sensibilidade de 97,4% e especificidade de 98,7% para SDS; sensibilidade de 97,2% e especificidade de 98,7% para Triton X-100; e 97,3% de sensibilidade e 99,1% de especificidade para Tween 20. CFBov foi cultivada por mais de 3 anos, por mais de 40 passagens, sem nenhuma alteração perceptível na morfologia ou na taxa de multiplicação celular. O estudo mostrou que a utilização do tratamento em células bovinas com SDS, Triton 100 e Tween 20 melhorou a sensibilidade e eficiência do teste para detecção de Lentivirus capartenc.