Tissue-Blot Enzyme Immunoassay for the massive diagnosis of Leifsonia xyli subsp. xyli in sugarcane (Saccharum spp.) in Cuba | Inmuno Impresión Directa de Tejidos para el diagnóstico masivo de Leifsonia xyli subsp. xyli en caña de azúcar (Saccharum spp.) en Cuba

English. External and internal symptoms caused by the bacterium Leifsonia xyli subsp. xyli in sugarcane are unspecific, therefore not suitable for its identification. The aim of this work was to standardize and validate the tissue blot immuno-assay technique (TBIA) for the massive diagnosis of the bacterium in this crop. To this purpose cultivars CP31-294 (infected) and My5514 (bacterium free) were selected. Different dilutions were of the specific anti L. xyli subsp. xyli (goat) and the anti goat alkaline phosphatase were proven. One hundred forty cylinders of sugarcane stems were used (70 positive and 70 negative) to validate the TBIA technique by with to Polymerase Chain Reaction (PCR) technique. The standardization of TBIA for diagnostic was achieved with the specific antibody diluted 1/3000 and the conjugate diluted 1/800. The validation indicators showed the high correspondence between diagnosed samples from TBIA and PCR. This result showed that TBIA technique may be used as a method for the detection of this bacterium in sugarcane, allowing to analyze a great number of samples in a short time with less cost and high reliability.

Spanish; Castilian. Los síntomas, tanto externos como internos de la enfermedad raquitismo de los retoños causada por la bacteria Leifsonia xyli subsp. xyli (Davis) Evtushenko et al. en la caña de azúcar, son inespecíficos, por lo que no son suficientes para su identificación. El objetivo de este trabajo fue utilizar la técnica Inmuno Impresión Directa de Tejidos para el diagnóstico masivo de la bacteria causante del raquitismo de los retoños en la caña de azúcar en Cuba. Se utilizaron los cultivares CP31-294 (infectado) y My5514 (sana). Se probaron diferentes diluciones del anticuerpo específico anti-L. xyli subsp. xyli (cabra) y el anticabra conjugado con fosfatasa alcalina. En la confirmación de la técnica serológica mediante la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) se utilizaron 140 cilindros de tallos de caña de azúcar (70 positivos y 70 negativos). Quedó establecida la técnica de diagnóstico serológico con el anticuerpo específico (cabra) diluido 1/3000 y el conjugado anticabra fosfatasa alcalina 1/800. Se encontró alta correspondencia entre los resultados del diagnóstico de las muestras por Inmuno Impresión Directa de Tejidos y la PCR. Los resultados de este estudio demuestran la posibilidad de utilizar la Inmuno Impresión Directa de Tejidos para la detección de la bacteria L. xyli en la caña de azúcar, mediante un procedimiento simple que permite analizar gran número de muestras en poco tiempo, con menor costo y alta confiabilidad.