Padronização e avaliação do teste enzimático da arylsulfatase a em plasma sanguíneo de caprinos leiteiros.

Resumo: A Artrite Encefalite Viral Caprina (CAEV), é uma enfermidade clinicamente e economicamente importante, causada pelo vírus do gênero Lentivírus, pertencente à família Retroviridae, estando presente, principalmente, em rebanhos caprinos leiteiros, nos sistemas de produção mais intensivo, que possibilitam maior contato entre os animais. O objetivo deste estudo foi testar a metodologia de diagnóstico enzimático para identificação da Arylsulfatase A (ARSA), em caprinos leiteiros com a infecção pelo CAEV em caprinos leiteiros criados na região nordeste do Brasil. As análises diagnósticas para o estudo foram conduzidas no laboratório de biologia molecular e proteômica da Embrapa Caprinos e Ovinos, localizada em Sobral – CE, na região norte do e stado do Ceará. As etapas principais foram a padronização e validação do teste enzimático para avaliação de ARSA em caprinos leiteiros, subdividindo em fases experimentais que foram desde a construção da curva analítica, passando pela avaliação do material analítico e alíquotas de plasma de sangue de 56 animais (30 animais soro positivos e 26 negativos para CAE), perfazendo um total de 152 avaliações em duplicata, com teste já padronizado. Os animais foram testados para CAE, através do teste sorológico Western Blotting (WB), sendo sequencialmente realizada a dosagem enzimática de ARSA através da técnica que se baseia em uma hidrólise de quatro horas da enzima ARSA em 4- nitrocatechol substrato sulfato (p-NCS). Os parâmetros de validação do teste enzimático envolveram etapas, como: avaliação da Especificidade, Linearidade, Sensibilidade, Exatidão e Precisão. Foram encontrados os primeiros valores molares médios de referência para o teste diagnóstico enzimático em caprinos (0,064 mM em caprinos machos castrados e 0,074 em cabras). Os parâmetros avaliados da técnica, são iniciais mas podem ser considerados validos e pioneiros para se estabelecer o perfil de Arylsulfatase A (ARSA) em caprinos leiteiros. Necessitam mais avaliações em futuras pesquisas que venham conferir robustez a técnica com o aumento no número de análises realizadas para poder diagnosticar animais com CAE. ABSTRACT Caprine Viral Encephalitis Arthritis (CAEV) is a clinically and economically important disease caused by the virus of the genus Lentivirus, belonging to the Retroviridae family, being present mainly in dairy goat herds, in the most intensive production systems, which allow greater contact between animals. The aim of this study was to test the methodology of enzymatic diagnosis for the identification of Arylsulfatase A (ARSA), in dairy goats with CAEV infection raised in northeastern Brazil. The diagnostic analyses for the study were carried out at the molecular biology and proteomics laboratory of Embrapa Goats and Sheep, located in Sobral – CE, northern Ceará. The main steps were the standardization and validation of the enzyme test for the evaluation of ARSA in dairy goats, subdividing into experimental phases that ranged from the construction of the analytical curve, through the evaluation of the analytical material and evaluation of blood plasma aliquots of 56 animals (30 positive and 26 negative for CAE), making a total of 152 duplicate evaluations, with a standardized test. The animals were tested for CAE using the Western Blotting (WB) serological test, the enzymatic dosage of ARSA was sequentially performed using the technique that is based on a four-hour hydrolysis of the ARSA enzyme in 4-nitrocatechol sulfate substrate (p-NCS). The validation parameters of the enzyme test involved evaluative steps such as: evaluation of Specificity, Linearity, Sensitivity, Accuracy and Precision. The first mean molar reference values for the enzymatic diagnostic test in goats were found (0.064 mM in castrated male goats and 0.074 in goats). The evaluated parameters of the technique can be considered valid and pioneering to establish the Arylsulfatase A (ARSA) profile in dairy goats. More evaluations are needed in future studies that will give robustness to the technique with the increase in the number of analyzes performed to be able to diagnose animals with CAE. Keywords: Dairy goat, CAE, Enzymatic Test, Western Blotting

Dissertação (Mestrado em Zootecnia) - Universidade Estadual Vale do Acaraú, Sobral. Orientadora: Ângela Maria Xavier Eloy, CNPC.