The causative agent of bovine tuberculosis (BTB) is <em>Mycobacterium bovis</em>, a bacteria belonging to <em>M. tuberculosis</em> complex (MTC). The definitive diagnosis is realized by isolation and identification of the <em>M. bovis</em> from clinical samples, using a combination of traditional culture and biochemical methods, which is considered the “gold standard”. This procedure is cumbersome and time-consuming. We evaluated a PCR assay for the direct detection of MTC DNA in naturally contaminated milk, using primers that were previously tested and proven reliable to target the <em>IS6110 </em>element. Milk previously seeded with <em>M. bovis</em> was used as the starting material, for padronization of the technique. The procedure involved extracting the DNA by enzymatic lysis (proteinase K and lysozyme), phenol, chloroform, isoamyl alcohol, followed by ethanol precipitation and PCR. The PCR assay allowed us to detect BTB in artificially contaminated milk, with a detection limit of 100 CFU/mL, and was also able to detect the bacillus in 50% (75/150) of samples from naturally infected animals. This procedure could be used to assist the <em>in vivo</em> diagnosis for BTB, complementing the sorological or microbiological tests and becomes an alternative option for implementation in epidemiological studies of BTB transmission and to prevent contaminated milk from entering the food supply. | O agente causador da tuberculose bovina (BTB) é o <em>Mycobacterium bovis</em>, uma bactéria pertencente ao complexo <em>M. tuberculosis</em> (CMT). O diagnóstico definitivo é realizado através do isolamento e identificação de <em>M. bovis</em> em amostras clínicas, utilizando uma combinação de cultura bacteriológica e métodos bioquímicos, que são considerados como "padrão de ouro". Entretanto esses procedimentos são trabalhosos e demorados. No seguinte estudo avaliamos um ensaio de PCR para a detecção direta de DNA de CMT em leite de vacas positivas ao teste cutâneo, utilizando <em>primers</em> previamente testados e comprovadamente confiáveis, para amplificação da região de interesse <em>IS6110</em>. Leite previamente contaminado com <em>M. bovis</em> foi utilizado como material de partida, para a padronização da técnica. O procedimento envolveu a extração do DNA por lise enzimática (proteinase K e lisozima), fenol, clorofórmio, álcool isoamílico, seguido de precipitação com etanol e PCR. O ensaio de PCR permitiu detectar BTB em leite artificialmente contaminado, com um limite de detecção de 100 UFC/mL, e também foi capaz de detectar o bacilo em 50% (75/150) de amostras de leite testadas. A técnica de PCR pode ser utilizada para auxiliar o diagnóstico <em>in vivo</em> da BTB, além de complementar os testes sorológicos ou microbiológicos, tornando-se uma alternativa para estudos epidemiológicos da transmissão de BTB, prevenindo que o leite contaminado entre na cadeia de alimentos.

Com a finalidade de estabelecer os valores de referência dos teores de proteína, gordura e sólidos totais do leite de bovinos da raça Jersey, criados no Estado de São Paulo, durante o primeiro mês de lactação, bem como avaliar a influência da fase colostral, examinaram-se 418 amostras de leite, provenientes de quartos mamários sadios e sem crescimento bacteriano. O leite foi colhido assepticamente antes da ordenha e os valores de proteína, gordura e sólidos totais foram determinados por radiação infra vermelho. Os teores de proteína na secreção láctea diminuíram abruptamente do 1º para o 2º dia de lactação, enquanto os teores de sólidos totais diminuíram abruptamente nas primeiras 24 horas após o parto. Após oscilaram muito nos primeiros três dias de lactação, observou-se que os valores de gordura diminuíam atingindo os valores mínimos entre o 15º e 30º dia de lactação. Sugere-se nas primeiras 24 horas de lactação (período colostral) a adoção dos seguintes valores de referência: proteína - entre 7,35 e 11,45 g/dL; gordura - 0,98 e 2,00 g/dL; e sólidos totais - entre 12,39 e 19,45 g/dL | With the aim to establish reference values of the protein, fat and total solids of milk from Jersey cows, raised in the State of São Paulo, during the first month of lactation, as well as to evaluate the influence of the colostral phase, 418 milk samples, obtained from healthy mammary glands without bacterial growth, were analized. Milk samples were aseptically collected before milking and protein, fat and total solids determined by infrared radiation. The milk protein level decrease from first to second day of lactation, while milk total solids level decreased during the first 24 hours after parturition. Milk fat level oscillated in the first 3 days of lactation and then decreased to the minimum values between 15-30 days of lactation. We suggest, for the first 24 hours of lactation (colostral phase) the use of the following reference values: protein- between 7,35 and 11,45 g/dl; fat- between 0,98 and 2,00 g/dl ; total solids - between 12,39 and 19,45 g/dl

O presente estudo teve por objetivo avaliar funcionalmente os macrófagos lácteos "nonelicited" presentes por meio de testes de fagocitose, espraiamento e liberação de peróxido de hidrogênio. Foram colhidas 56 amostras de leite de 15 búfalas hígidas e mensuradas a contagem de células somáticas total e diferencial, a viabilidade celular, os testes de fagocitose, de espraiamento e a liberação de peróxido de hidrogênio. Dessas variáveis obteve-se respectivamente média de 14.500 cél/mL de leite; com mediana de 4,33% de linfócitos e médias e desvios padrão de 50,77% + 18,28 de células da série monócito/macrófago e 32,13% + 19,27 de polimorfonucleares. A viabilidade das células na suspensão foi 66,8% +15,8 e os índices de fagocitose e espraiamento foram 30,1% + 16,9 e 58,5% +13,3. Não houve diferença entre a liberação de H2O2 espontânea e induzida por PMA. Concluiu-se que os macrófagos presentes no leite de búfalas hígidas e espraiaram significativamente, além de apresentarem correlação com outro marcador de ativação celular, no caso, a liberação de peróxido de hidrogênio; mais da metade dos macrófagos aderidos fagocitaram partículas de zymosan; os fagócitos mantêm sua capacidade de liberar peróxido de hidrogênio, espontaneamente ou não, em grau máximo, com uma significativa variação entre amostras. | The objective of the present study was to evaluate the functioning of nonelicited dairy macrophages present in phagocytosis, spreading and hydrogen peroxide release tests. Fifty-six samples of milk were collected from 15 healthy buffaloes. Total and differential somatic cell counts, cell viability, and indexes of phagocytosis, spreading and hydrogen peroxide release were assessed. The following values were obtained: mean of 14,500 cells/mL of milk, with median equal to 4.33% of lymphocytes; mean and standard deviation equal to 50.77% + 18.28 of monocytes / macrophages and 32.13% + 19.27 polymorphouclear cells. Mean viability of cells in suspension was 66.8% +15.8; phagocytosis and spreading indexes were equal to 30.1% + 16.9 and 58.5% +13.3, respectively. There was no difference between the spontaneous release of H2O2 and the one induced by PMA. It was concluded that nonelicited macrophages present in the milk of healthy buffaloes were significantly capable to spread and phagocyte. Phagocytes presented the ability to release hydrogen peroxide either spontaneously or not, in a maximum level and with a significant variation between samples.

The effect of dietary supplementation with coconut oil (CO) with four levels (0, 4, 8 and 16%) on the variation of blood and milk composition of lactating mares were investigated. Sixteen lactating mares were used with average live weight of 441.2 kg. Mares were supplemented with 1,5% of live weight with concentrate composed of corn meal, wheat bran and soybean meal with 16% crude protein. Forage was Napier grass and mineral supplement and water supplied "ad libitum". Mares were allotted to 16 pens (4x5m) and randomly assigned to receive each of four diets once a day during 42 days. Samples of blood (50 ml) were collected for analysis of triglycerides and cholesterol. Samples of milk (250 ml) were collected manually for analyses of acidity, fat and cholesterol. At the end of the experiment the supplementation with CO showed respectively for blood: triglycerides, 24; 32; 28 and 25 mg dl-1; cholesterol, 107; 136; 126 and 129 mg dl-1 and for milk: acidity, 10; 9; 8 and 7 ºD; fat, 0,6; 1,1; 0,9 and 0,9%. Cholesterol in the fat of the milk, 366.5; 308.6; 447.9 and 491.0 mg.100g-1. The supplementation with CO, increased the triglycerides levels and plasmatic cholesterol, with linear effect; they reduced the level of acidity and increased fat content of milk with linear effect and they had no effect on cholesterol content in the milk. | Foi investigada a suplementação de dietas com óleo de babaçu nos níveis de (0, 4, 8 e 16%) na composição do sangue e leite de éguas em lactação. Utilizaram-se 16 éguas em lactação, sem raça definida com peso vivo médio de 441,2 kg. As éguas foram suplementadas com 1,5% do peso vivo com uma mistura composta de quirera de milho, farelo de trigo e farelo de soja com 16% de proteína bruta. A água e o volumoso constituído de Napier e suplemento mineral, foram oferecidos ad libitum. Colocadas em baias individuais com 4 x 5m as éguas recebiam as dietas tratamento uma vez ao dia.Elas foram alimentadas durante 42 dias. Coletaram-se amostras de 50 ml de sangue para análise de triglicerídeos e colesterol total e 250 ml de leite colhido manualmente para as análises de acidez, teor de gordura e colesterol. O sangue apresentou, ao término do experimento, os seguintes teores: triglicerídeos (24, 32, 28 e 25 mg dl-1), colesterol (107, 136, 126 e 129 mg dl-1 ) e para o leite, os teores encontrados foram: (acidez 10, 9, 8 e 7 ºD), gordura (0,6; 1,1; 0,9 e 0,9 %), colesterol na gordura do leite (366,5; 308,6; 447,9 e 491,0 mg.100g-1). A suplementação com óleo de babaçu aumentou os níveis de triglicerídeos e colesterol plasmáticos com efeito linear. Quanto ao leite, diminuiu o teor de acidez e aumentou os teores de gordura com efeito linear, mas não afetou o teor de colesterol.

A influência do estágio de lactação na composição do leite de cabras foi estudada em 27 animais lactantes da raça Saanen durante oito meses, colhendo-se o total de 304 amostras. Foram selecionados e mantidos, no decorrer do trabalho, animais saudáveis, sem qualquer alteração no exame físico da glândula mamária e cujo leite manteve-se negativo ao exame microbiológico. Avaliaram-se os teores de gordura, proteína, lactose e sólidos totais. A concentração de sólidos totais, gordura e lactose declinaram durante a lactação, porém os teores de proteína foram praticamente estáveis durante o período estudado. Os resultados obtidos permitem concluir que a constituição do leite de cabras sofreu influência do estágio de lactação. | The influence of the stage of lactation in the composition of goat milk was studied in 27 Saanen goats during eight months. These animals provided a total of 304 samples that were microbiologically negative. Animals were healthy and presented no alterations in the physical examination of the mammary gland. The following analyses were performed: concentration of fat, protein, lactose and total solids. Protein concentrations were stable during the whole trial, whereas total solids, fat and lactose decreased during lactation. The results showed that the constitution of goat milk is influenced by the stage of lactation.

Sementes de Crotalaria spectabilis, as quais contêm o alcalóide pirrolizidínico (AP), monocrotalina (MCT), foram moídas e administradas junto com a ração a uma cabra em lactação. O leite dessa cabra foi liofilizado e oferecido na ração por 8 semanas a ratos para determinar se a MCT ou seus metabólitos poderiam estar sendo significantemente eliminados no leite. Os ratos provenientes do grupo experimental apresentaram aumento significante (p&lt;0,05) nos níveis séricos de ALT, AST, GGT e LDH e menor ganho de peso (p&lt;0,05) que os ratos do grupo controle. As lesões mais significativas observadas nos animais que ingeriram a ração experimental foram pneumonia intersticial moderada e degeneração vacuolar e ocasionalmente necrose dos hepatócitos de região periportal. Os resultados deste estudo indicam que o AP e/ou seus metabólitos podem ser eliminados no leite. | Seeds of Crotalaria spectabilis, containing the pyrrolizidine alkaloid (PA) monocrotaline (MCT), were fed to a lactating dairy goat. Milk from this goat was fed to rats for 8 weeks to determine whether MCT or its toxic metabolites are transferred into the goat’s milk. Rats from the experimental group showed significantly higher (p&lt;0.05) serum levels of ALT, AST, GGT and LDH and less weight gains (p&lt;0.05) than control rats. The most significant lesions in rats consuming the experimental ration were mild to moderate interstitial pneumonia and a vacuolar degeneration and occasionally necrosis of periportal hepatocytes. The results of this study indicate that the PA and/or its metabolites are eliminated in milk.

The objective of this study was to evaluate the effects of raw milk somatic cell removal by microfiltration on lipolysis of pasteurized milk during refrigerated storage. A completely randomized design was used, with 3 repetitions and a 2 X 2 X 2 factorial arrangement of treatments as follow: milk fat level (skimmed and whole milk), two different levels of somatic cell counts - low somatic cell count (LSCC) and high somatic cell count (HSCC) - and, use of microfiltration or not. LSCC raw milk - 75,000 cells/ml - and HSCC raw milk - 1,150,000 cells/ml - were obtained from selected cows, skimmed and submitted to vacuum microfiltration. Milk from all treatments was pasteurized and kept refrigerated at 6ºC for 21 days. Repeated measures during storage time were taken from pasteurized milk at days 1, 7, 14 and 21. The application of milk microfiltration was efficient on somatic cell removal, with reduction of 92,5 and 99,5% for LSCC and HSCC, repectively. Lipolysis of milk was increased during storage period and was higher for milk submitted to microfiltration, however no effect of SCC was observed. Lipolysis in pasteurized milk increased independently of SCC, during its refrigerated storage period. | O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da retirada mecânica das células somáticas do leite cru sobre a taxa de lipólise durante o armazenamento refrigerado do leite pasteurizado. O delineamento experimental utilizado foi totalmente casualizado, com três repetições e arranjo fatorial de tratamentos 2 X 2 X 2, constituídos por dois nível de gordura do leite (desnatado e integral), dois níveis de contagem de células somáticas (CCS baixa - CCSB e CCS alta - CCSA), e pela aplicação ou não da microfiltração ao leite. Três lotes de leite cru CCSB (75.000 cél./mL) e CCSA (1.150.000 cél./mL) foram obtidos de vacas selecionadas e submetidos ao desnate centrífugo, à microfiltração em sistema a vácuo, sendo em seguida pasteurizados e armazenados por 21 dias sob refrigeração a 6ºC. Foram realizadas medidas repetidas no tempo, as quais corresponderam aos dias de coleta do leite pasteurizado durante o período de armazenamento (1, 7, 14 e 21). A microfiltração associada ao desnate foram eficazes na remoção das células somáticas do leite, com reduções de 92,5 e 99,5% para o leite CCSB e CCSA, respectivamente. A lipólise do leite aumentou em função do tempo de armazenamento e foi maior para o leite microfiltrado, contudo não sofreu influência da CCS. Independentemente da CCS, ocorreu aumento da lipólise do leite pasteurizado durante o período de armazenamento.

548 udder abubaline quarters were studied, clinical exam, CMT to mastitis detection and collection samples to bacteriology isolament realized. Corynebacterium aquaticum grew in two samples and were characterized by biochemical analisis. In this paper we reported the agent participation in udder colonization and the possibility of buffaloes infections mastitis. | Estudou-se 548 quartos mamários de búfalas, realizando-se exame clínico, CMT para detecção de mastite e coleta de amostras para isolamento bacteriano. Houve crescimento em duas amostras de Corynebacterium aquaticum caracterizadas bioquimicamente. Relata-se a participação do agente como colonizador do úbere e possível causador de mastites em bubalinos.

In laboratory, electronic determination of somatic cell count (SCC) and concentration of lactose and total solids of 1,361 milk samples were carried out in order to evaluate the effects of somatic cell count (SCC) on the concentrations of milk lactose and total solids. All the SCC data were transformed to a linear score. Increases in the SCC score were associated with decreased lactose concentration. This increase was highly significant (p &lt; 0.0001), and about 34% of the lactose concentration variation could be accounted for variation of the SCC score. Total solids were not influenced by the SCC score. | Em laboratório foram determinadas eletronicamente a contagem de células somáticas (CCS) e as concentrações de lactose e sólidos totais de 1.361 amostras de leite com o objetivo de verificar como a concentração desses componentes do leite é alterada pelo aumento da CCS. A CCS foi transformada para escore linear. O aumento do escore levou a uma redução da concentração de lactose, mas não alterou a concentração de sólidos totais. A redução da concentração de lactose foi altamente significativa (p &lt; 0,001), e aproximadamente 34% da variação de sua concentração podem ser explicados pelo aumento do escore linear.

A brucelose é uma zoonose crônica de importância para a Saúde Pública. Considerando o pequeno número de dados brasileiros sobre a sua presença em leite cru e derivados não-pasteurizados, estudamos a presença de brucelas em leite de animais sorologicamente positivos. A soroaglutinação rápida (SAR), a soroaglutinação lenta (SAL) e a soroaglutinação lenta com tratamento do soro com 2-mercaptoetanol foram utilizados para identificar os animais positivos nas propriedades estudadas. Amostras diárias de 300 ml de leite foram colhidas por três dias de todos os quartos mamários produtivos (75 ml/teto). As amostras eram misturadas e centrifugadas. Parte do sedimento e do sobrenadante foi inoculada em meios de Farrel e Brodie-Sinton (BS) suplementados com agentes antimicrobianos. As placas e tubos foram cultivados por sete dias a 37ºC, em microaerofilia. As colônias suspeitas no meio BS foram imediatamente repicadas para ágar-Brucella, e cultivadas sob a mesma condição. Os microrganismos isolados foram submetidos a procedimentos de identificação, incluindo a coloração de Gram, requerimento de CO2, produção de H2S, atividade da urease e crescimento na presença de tionina e fucsina. Das 49 amostras examinadas, isolou-se Brucella abortus de 15 (30,61%). Os biótipos isolados foram: biótipo 1 em uma amostra (2,04%), biótipo 2 em oito (16,32%) e biótipo 3 em seis amostras (12,25%) | Brucellosis is a chronic zoonosis that plays an important role in Public Health. Considering the lack of data in Brazil regarding its presence in raw milk and non-pasteurized dairy products, we determined the presence of brucellae in milk from brucellosis positive animals. The slide agglutination test (SAT), tube agglutination test (TAT) and TAT treated with 2-mercaptoethanol were used to identify positive animals in studied herds. For 3 days, 300 ml milk samples/cow (75 ml/teat) were collected from all productive quarters of the positive animals. These were mixed and centrifuged. Part of the pellet and of the supernatant were inoculated in Farrel and Brodie-Sinton (BS) media supplemented with antimicrobial agents. The inoculated plates and tubes were incubated at 37ºC for 7 days, with 10 per cent CO2 atmosphere. The suspected bacterial growth in BS media was immediately cultivated in agar Brucella media, under the same conditions. Colonies were submitted to identification procedures including Gram stain, CO2 requirement, H2S production, urease activity and growth in the presence of thionin and fuchsin. Of the 49 analysed samples, 15 (30.61%) contained Brucella abortus. The distribution was as follows: biotype 1 in one sample (2.04%), biotype 2 in eight (16.32%) and biotype 3 in six samples (12.25%).