A produção de aflatoxinas é afetada por parâmetros abióticos, bióticos e genéticos. As condições eugenésicas e disgenésicas da aflatoxinogênese estão relativamente bem estudadas, tal como as influências ecológicas (temperatura, pH, Aw, tensão de oxigênio, pressão osmótica, nutrientes e substâncias fungistáticas). Contudo, é muito escasso o conhecimento relativo aos mecanismos reguladores endógenos, à cinética do anabolismo e à interação dos fungos produtores com a restante microflora presente em substratos eutrofizantes. O principal objetivo deste estudo é avaliar a interação de cinco estirpes indígenas de A. flavus, comprovadamente atoxígenas, com uma geneticamente apta (A. parasiticus ATCC 15517), cultivadas simultaneamente em dois substratos: um natural (milho triturado) e outro sintético (Caldo de Czapeck-Dox Modificado). A quantificação das aflatoxinas foi efetuada no 8º e 12º dias de incubação, por Cromatografia Líquida de Alta Resolução (HPLC). Os resultados demonstraram que todas as estirpes foram sinérgicas, aumentando o rendimento da produção entre 5,6 e 106,5%, quando comparados com os valores das testemunhas. | Aflatoxins production is affected by abiotic, biotic and genetic parameters. Eugenesic and dysgenetic condition for aflatoxinogenesis are relatively well studied, such as: the influence of temperature, pH, Aw, Oxigen tension, osmotic pression, organic and inorganic nutrients, substance with fungistatic effects: however there are relatively few knowledge about endogenous regulator mechanisms, the kinetic of the anabolism and the interaction between the productive moulds and remaining microflora holding in eutrophying substrates. The main objective of this study is to evaluate biotic interaction between five indigenous strains of A. flavus, confirmed non-toxigenic, and a productive strain (A. parasiticus ATCC 15 517), cultured simultaneously on two substrates: one natural (cracked corn) and a synthetic one, modified Czapeck-Dox broth. Aflatoxins quantifications were performed by HPLC at 8th and 12th days. Results of those interactive cultures showed that all strains were synergic, increasing aflatoxins production in a range between 5.6 and 106.5% over the control values, with an exception registered on one of the strains cultured in cracked corn at the 12th day, where the production decreased (-7.6%).

Aflatoxins production is affected by abiotic, biotic and genetic parameters. Eugenesic and dysgenetic condition for aflatoxinogenesis are relatively well studied, such as: the influence of temperature, pH, Aw, Oxigen tension, osmotic pression, organic and inorganic nutrients, substance with fungistatic effects: however there are relatively few knowledge about endogenous regulator mechanisms, the kinetic of the anabolism and the interaction between the productive moulds and remaining microflora holding in eutrophying substrates. The main objective of this study is to evaluate biotic interaction between five indigenous strains of A. flavus, confirmed non-toxigenic, and a productive strain (A. parasiticus ATCC 15 517), cultured simultaneously on two substrates: one natural (cracked corn) and a synthetic one, modified Czapeck-Dox broth. Aflatoxins quantifications were performed by HPLC at 8th and 12th days. Results of those interactive cultures showed that all strains were synergic, increasing aflatoxins production in a range between 5.6 and 106.5% over the control values, with an exception registered on one of the strains cultured in cracked corn at the 12th day, where the production decreased (-7.6%). | A produção de aflatoxinas é afetada por parâmetros abióticos, bióticos e genéticos. As condições eugenésicas e disgenésicas da aflatoxinogênese estão relativamente bem estudadas, tal como as influências ecológicas (temperatura, pH, Aw, tensão de oxigênio, pressão osmótica, nutrientes e substâncias fungistáticas). Contudo, é muito escasso o conhecimento relativo aos mecanismos reguladores endógenos, à cinética do anabolismo e à interação dos fungos produtores com a restante microflora presente em substratos eutrofizantes. O principal objetivo deste estudo é avaliar a interação de cinco estirpes indígenas de A. flavus, comprovadamente atoxígenas, com uma geneticamente apta (A. parasiticus ATCC 15517), cultivadas simultaneamente em dois substratos: um natural (milho triturado) e outro sintético (Caldo de Czapeck-Dox Modificado). A quantificação das aflatoxinas foi efetuada no 8º e 12º dias de incubação, por Cromatografia Líquida de Alta Resolução (HPLC). Os resultados demonstraram que todas as estirpes foram sinérgicas, aumentando o rendimento da produção entre 5,6 e 106,5%, quando comparados com os valores das testemunhas.

A brucelose é uma zoonose crônica de importância para a Saúde Pública. Considerando o pequeno número de dados brasileiros sobre a sua presença em leite cru e derivados não-pasteurizados, estudamos a presença de brucelas em leite de animais sorologicamente positivos. A soroaglutinação rápida (SAR), a soroaglutinação lenta (SAL) e a soroaglutinação lenta com tratamento do soro com 2-mercaptoetanol foram utilizados para identificar os animais positivos nas propriedades estudadas. Amostras diárias de 300 ml de leite foram colhidas por três dias de todos os quartos mamários produtivos (75 ml/teto). As amostras eram misturadas e centrifugadas. Parte do sedimento e do sobrenadante foi inoculada em meios de Farrel e Brodie-Sinton (BS) suplementados com agentes antimicrobianos. As placas e tubos foram cultivados por sete dias a 37ºC, em microaerofilia. As colônias suspeitas no meio BS foram imediatamente repicadas para ágar-Brucella, e cultivadas sob a mesma condição. Os microrganismos isolados foram submetidos a procedimentos de identificação, incluindo a coloração de Gram, requerimento de CO2, produção de H2S, atividade da urease e crescimento na presença de tionina e fucsina. Das 49 amostras examinadas, isolou-se Brucella abortus de 15 (30,61%). Os biótipos isolados foram: biótipo 1 em uma amostra (2,04%), biótipo 2 em oito (16,32%) e biótipo 3 em seis amostras (12,25%) | Brucellosis is a chronic zoonosis that plays an important role in Public Health. Considering the lack of data in Brazil regarding its presence in raw milk and non-pasteurized dairy products, we determined the presence of brucellae in milk from brucellosis positive animals. The slide agglutination test (SAT), tube agglutination test (TAT) and TAT treated with 2-mercaptoethanol were used to identify positive animals in studied herds. For 3 days, 300 ml milk samples/cow (75 ml/teat) were collected from all productive quarters of the positive animals. These were mixed and centrifuged. Part of the pellet and of the supernatant were inoculated in Farrel and Brodie-Sinton (BS) media supplemented with antimicrobial agents. The inoculated plates and tubes were incubated at 37ºC for 7 days, with 10 per cent CO2 atmosphere. The suspected bacterial growth in BS media was immediately cultivated in agar Brucella media, under the same conditions. Colonies were submitted to identification procedures including Gram stain, CO2 requirement, H2S production, urease activity and growth in the presence of thionin and fuchsin. Of the 49 analysed samples, 15 (30.61%) contained Brucella abortus. The distribution was as follows: biotype 1 in one sample (2.04%), biotype 2 in eight (16.32%) and biotype 3 in six samples (12.25%).

Brucellosis is a chronic zoonosis that plays an important role in Public Health. Considering the lack of data in Brazil regarding its presence in raw milk and non-pasteurized dairy products, we determined the presence of brucellae in milk from brucellosis positive animals. The slide agglutination test (SAT), tube agglutination test (TAT) and TAT treated with 2-mercaptoethanol were used to identify positive animals in studied herds. For 3 days, 300 ml milk samples/cow (75 ml/teat) were collected from all productive quarters of the positive animals. These were mixed and centrifuged. Part of the pellet and of the supernatant were inoculated in Farrel and Brodie-Sinton (BS) media supplemented with antimicrobial agents. The inoculated plates and tubes were incubated at 37ºC for 7 days, with 10 per cent CO2 atmosphere. The suspected bacterial growth in BS media was immediately cultivated in agar Brucella media, under the same conditions. Colonies were submitted to identification procedures including Gram stain, CO2 requirement, H2S production, urease activity and growth in the presence of thionin and fuchsin. Of the 49 analysed samples, 15 (30.61%) contained Brucella abortus. The distribution was as follows: biotype 1 in one sample (2.04%), biotype 2 in eight (16.32%) and biotype 3 in six samples (12.25%). | A brucelose é uma zoonose crônica de importância para a Saúde Pública. Considerando o pequeno número de dados brasileiros sobre a sua presença em leite cru e derivados não-pasteurizados, estudamos a presença de brucelas em leite de animais sorologicamente positivos. A soroaglutinação rápida (SAR), a soroaglutinação lenta (SAL) e a soroaglutinação lenta com tratamento do soro com 2-mercaptoetanol foram utilizados para identificar os animais positivos nas propriedades estudadas. Amostras diárias de 300 ml de leite foram colhidas por três dias de todos os quartos mamários produtivos (75 ml/teto). As amostras eram misturadas e centrifugadas. Parte do sedimento e do sobrenadante foi inoculada em meios de Farrel e Brodie-Sinton (BS) suplementados com agentes antimicrobianos. As placas e tubos foram cultivados por sete dias a 37ºC, em microaerofilia. As colônias suspeitas no meio BS foram imediatamente repicadas para ágar-Brucella, e cultivadas sob a mesma condição. Os microrganismos isolados foram submetidos a procedimentos de identificação, incluindo a coloração de Gram, requerimento de CO2, produção de H2S, atividade da urease e crescimento na presença de tionina e fucsina. Das 49 amostras examinadas, isolou-se Brucella abortus de 15 (30,61%). Os biótipos isolados foram: biótipo 1 em uma amostra (2,04%), biótipo 2 em oito (16,32%) e biótipo 3 em seis amostras (12,25%)

A brucelose é uma zoonose crônica de importância para a Saúde Pública. Considerando o pequeno número de dados brasileiros sobre a sua presença em leite cru e derivados não-pasteurizados, estudamos a presença de brucelas em leite de animais sorologicamente positivos. A soroaglutinação rápida (SAR), a soroaglutinação lenta (SAL) e a soroaglutinação lenta com tratamento do soro com 2-mercaptoetanol foram utilizados para identificar os animais positivos nas propriedades estudadas. Amostras diárias de 300 ml de leite foram colhidas por três dias de todos os quartos mamários produtivos (75 ml/teto). As amostras eram misturadas e centrifugadas. Parte do sedimento e do sobrenadante foi inoculada em meios de Farrel e Brodie-Sinton (BS) suplementados com agentes antimicrobianos. As placas e tubos foram cultivados por sete dias a 37ºC, em microaerofilia. As colônias suspeitas no meio BS foram imediatamente repicadas para ágar-Brucella, e cultivadas sob a mesma condição. Os microrganismos isolados foram submetidos a procedimentos de identificação, incluindo a coloração de Gram, requerimento de CO2, produção de H2S, atividade da urease e crescimento na presença de tionina e fucsina. Das 49 amostras examinadas, isolou-se Brucella abortus de 15 (30,61%). Os biótipos isolados foram: biótipo 1 em uma amostra (2,04%), biótipo 2 em oito (16,32%) e biótipo 3 em seis amostras (12,25%)

Neste trabalho, a técnica de PCR ("polymerase chain reaction") foi utilizada para a sexagem de 92 embriões bovinos fertilizados in vitro. Os embriões originaram-se de fertilização in vitro de oócitos aspirados de ovários de fêmeas bovinas, provenientes de abatedouros comerciais. Os oócitos foram maturados, fertilizados e cultivados até o estádio de blastocisto. Os embriões foram lavados em solução de PBS, transferidos para tubos de polipropileno contendo água ultrapura, e imediatamente congelados a -196ºC. Os embriões foram descongelados sobre isopor contendo gelo picado e tratados com proteinase K. Para a reação de PCR, utilizaram-se alíquotas de 34 µl de cada tudo, onde foram acrescidos dois pares de primers, seqüência BC1.2 e seqüência satélite 1.715, desoxinucleotídeos, MgCl2, tampão PCR 10X, TaqDNA polimerase e água, em um volume final de 50 µl. As amostras foram amplificadas e a eletroforese realizada em gel de poliacrilamida a 8%. Os géis foram corados com solução de brometo de etídio e analisados em transiluminador de luz ultravioleta. Um índice de 93,47% de amplificação foi atingido, com 41 embriões (47,67%) machos e 45 (52,32%) embriões fêmeas. O uso de gel de poliacrilamida a 8% foi eficaz na separação de fragmentos de DNA muito próximos. | In the present study the polymerase chain reaction (PCR) was used for sexing ninety-two in vitro fertilized bovine embryos. The embryos were obtained after in vitro fertilization of oocytes from slaughterhouses. The oocytes were matured, fertilized, and cultured until the blastocyst stage. The embryos were washed in PBS solution, and transferred to polypropylene tubes with containing ultrapure water and immediately frozen at -196ºC. The embryos were thawed on ice and treated with proteinase K. For the PCR reaction, aliquots of 34 µl from each tube were mixed to the primers BC1.2 and microsatellite sequence 1715, dNTPs, MgCl2, 10X PCR buffer, Taq DNA polymerase and water in a final volume of 50 µl. The samples were amplified and the PCR products separated by electrophoresis in a 8% polyacrylamide gel. The gels were stained in ethidium bromide solution and vizualized under UV-light. The amplification rate was 93.47%, with 41 (47.67%) male embryos and 45 (52.32%) female embryos. The use of 8% polyacrylamide gel was efficient for separating DNA fragments of very similar size.

Neste trabalho, a técnica de PCR ("polymerase chain reaction") foi utilizada para a sexagem de 92 embriões bovinos fertilizados in vitro. Os embriões originaram-se de fertilização in vitro de oócitos aspirados de ovários de fêmeas bovinas, provenientes de abatedouros comerciais. Os oócitos foram maturados, fertilizados e cultivados até o estádio de blastocisto. Os embriões foram lavados em solução de PBS, transferidos para tubos de polipropileno contendo água ultrapura, e imediatamente congelados a -196ºC. Os embriões foram descongelados sobre isopor contendo gelo picado e tratados com proteinase K. Para a reação de PCR, utilizaram-se alíquotas de 34 µl de cada tudo, onde foram acrescidos dois pares de primers, seqüência BC1.2 e seqüência satélite 1.715, desoxinucleotídeos, MgCl2, tampão PCR 10X, TaqDNA polimerase e água, em um volume final de 50 µl. As amostras foram amplificadas e a eletroforese realizada em gel de poliacrilamida a 8%. Os géis foram corados com solução de brometo de etídio e analisados em transiluminador de luz ultravioleta. Um índice de 93,47% de amplificação foi atingido, com 41 embriões (47,67%) machos e 45 (52,32%) embriões fêmeas. O uso de gel de poliacrilamida a 8% foi eficaz na separação de fragmentos de DNA muito próximos.

Neste trabalho, a técnica de PCR ("polymerase chain reaction") foi utilizada para a sexagem de 92 embriões bovinos fertilizados in vitro. Os embriões originaram-se de fertilização in vitro de oócitos aspirados de ovários de fêmeas bovinas, provenientes de abatedouros comerciais. Os oócitos foram maturados, fertilizados e cultivados até o estádio de blastocisto. Os embriões foram lavados em solução de PBS, transferidos para tubos de polipropileno contendo água ultrapura, e imediatamente congelados a -196ºC. Os embriões foram descongelados sobre isopor contendo gelo picado e tratados com proteinase K. Para a reação de PCR, utilizaram-se alíquotas de 34 µl de cada tudo, onde foram acrescidos dois pares de primers, seqüência BC1.2 e seqüência satélite 1.715, desoxinucleotídeos, MgCl2, tampão PCR 10X, TaqDNA polimerase e água, em um volume final de 50 µl. As amostras foram amplificadas e a eletroforese realizada em gel de poliacrilamida a 8%. Os géis foram corados com solução de brometo de etídio e analisados em transiluminador de luz ultravioleta. Um índice de 93,47% de amplificação foi atingido, com 41 embriões (47,67%) machos e 45 (52,32%) embriões fêmeas. O uso de gel de poliacrilamida a 8% foi eficaz na separação de fragmentos de DNA muito próximos. | In the present study the polymerase chain reaction (PCR) was used for sexing ninety-two in vitro fertilized bovine embryos. The embryos were obtained after in vitro fertilization of oocytes from slaughterhouses. The oocytes were matured, fertilized, and cultured until the blastocyst stage. The embryos were washed in PBS solution, and transferred to polypropylene tubes with containing ultrapure water and immediately frozen at -196ºC. The embryos were thawed on ice and treated with proteinase K. For the PCR reaction, aliquots of 34 µl from each tube were mixed to the primers BC1.2 and microsatellite sequence 1715, dNTPs, MgCl2, 10X PCR buffer, Taq DNA polymerase and water in a final volume of 50 µl. The samples were amplified and the PCR products separated by electrophoresis in a 8% polyacrylamide gel. The gels were stained in ethidium bromide solution and vizualized under UV-light. The amplification rate was 93.47%, with 41 (47.67%) male embryos and 45 (52.32%) female embryos. The use of 8% polyacrylamide gel was efficient for separating DNA fragments of very similar size.