Dissertação de Mestrado em Enfermagem Veterinária de Animais de Companhia apresentada na Escola Superior Agrária de Ponte de Lima | Os ancilostomatídeos, os ascarídeos, os tricurídeos e os parasitas da família Taeniidae são bem conhecidos como sendo os parasitas intestinais mais prevalentes em cães. A redução da contagem de ovos fecais nas fezes é um método amplamente utilizado para avaliar a eficácia de anti-helmínticos contra parasitas gastrointestinais. Os objectivos deste estudo foram: realizar um estudo epidemiológico sobre diversidade e carga parasitária de helmintes intestinais e avaliar possíveis resistências a anti-helmínticos, em cães das regiões Norte e Centro de Portugal. Para o efeito foram recolhidas amostras fecais de cães em 18 concelhos, provenientes de 14 centros de recolhas oficiais, 5 canis de associações privadas e de 11 tutores particulares. Estas amostras foram analisadas através da metodologia Mini-FLOTAC®, em dois tempos distintos, no dia ou na véspera das desparasitações e 13 dias após as mesmas. A percentagem de eficácia foi calculada usando a fórmula das diretrizes da World Association for the Advancement of Veterinary Parasitology (WAAVP), e considerou-se que o anti-helmíntico era ineficaz, de baixa eficácia e moderadamente eficaz, se a redução de carga parasitária fosse menor de 60%, entre 60-79% e entre 80-89%, respetivamente. Para a análise estatística foi usado o programa R. Usou-se o teste qui-quadrado de Pearson para dados categóricos. Os valores P < 0,05 foram considerados estatisticamente significativos. Das 361 amostras fecais de cães recolhidas, foram identificadas formas parasitárias em 22,4%, nomeadamente os nematodes Trichuris vulpis (10,5%), Toxocara canis (8,0%), Ancylostomatidae (6,4%) e Toxascaris leonina (0,8%), e os cestodes Dipylidium caninum (0,6%) e Taeniidae (0,3%). Os primeiros três parasitas nematodes tiveram uma elevada intensidade de infeção em alguns cães, com uma eliminação máxima de 2900, 1325 e 1265 ovos por grama, respetivamente. Treze dias após tratamento antihelmíntico, foi realizada uma segunda colheita e análise fecal dos cães infetados na primeira recolha (n=77). Na segunda recolha, 20,8% das amostras evidenciaram formas parasitárias. De acordo com a percentagem de redução da carga parasitária verificou-se que para Trichuris vulpis, os anti-helmínticos febendazol + embonato de pirantel + praziquantel e praziquantel + fenbendazol foram ineficazes em 13,5% das amostras (n=5), febantel + praziquantel + pirantel e febendazol + embonato de pirantel + praziquantel tiveram baixa eficácia em 5,4% (n=2) e praziquantel + fenbendazol foi moderadamente eficaz em 2,7% (n=1). Já para Ancylostomatidae febendazol + embonato de pirantel + praziquantel e praziquantel + fenbendazol foram ineficazes em 6,8% (n=2) e febendazol + embonato de pirantel + praziquantel foi também moderadamente eficaz em 3,3% (n=1). As prevalências (geral e por forma parasitária) deste estudo não foram elevadas quando comparadas com outros realizados anteriormente em Portugal, contudo as formas parasitárias identificadas são todas reconhecidamente ou potencialmente zoonóticas, além de causadoras de doença animal. Este estudo é o primeiro a investigar a resistência anti-helmíntica em parasitas intestinais de cães em Portugal e a identificar ineficácia dos anti-helmínticos para Trichuris vulpis e Ancylostomatidae. Os resultados de baixa eficácia obtidos em poucos hospedeiros não sugerem resistência da comunidade de parasitas intestinais, mas podem indicar o metabolismo deficiente dos hospedeiros, pobre viabilidade do fármaco, reinfeção, entre outros fatores. Outros estudos deverão ser realizados no futuro para entender a extensão da resistência anti-helmíntica. | Hookworms, roundworms, whipworms and parasites of the Taeniidae family are well known to be the most prevalent intestinal parasites in dogs. Reducing faecal egg counts in faeces is a widely used method to assess the effectiveness of anthelmintics against gastrointestinal parasites. The aims of this study were: to carry out an epidemiological study on intestinal helminths diversity and parasite burden and to assess possible resistance to anthelmintics in dogs from the North and Center regions of Portugal. For this purpose, faecal samples were collected from dogs in 18 municipalities, from 14 public shelter dogs, 5 private shelter dogs and 11 private tutors. These samples were analysed using the Mini-FLOTAC® methodology, at two different times, on the day or the day before the deworming and 13 days after the same. Percentage of efficacy was calculated using the World Association for the Advancement of Veterinary Parasitology (WAAVP) guidelines formula, and the anthelmintics were considered to be ineffective, of low efficacy, and moderately effective if the reduction in parasite load was less than 60%, between 60-79% and between 80-89%, respectively. For statistical analysis, the R program was used. Pearson's chi-square test was used for categorical data. The values P < 0.05 were considered statistically significant. Of the 361 faecal samples collected from dogs, parasitic forms were identified in 22.4%, such as the nematodes Trichuris vulpis (10.5%), Toxocara canis (8.0%), Ancylostomatidae (6.4%) and Toxascaris leonina (0.8%), and the cestodes Dipylidium caninum (0.6%) and Taeniidae (0.3%). The first three nematode parasites had a high infection intensity in some dogs, with a total egg shedding of 2900, 1325 and 1265 egg per gram, respectively. Thirteen days after anthelmintic treatment, a second collection and faecal analysis was performed on infected dogs in the first collection (n=77). In the second collection, 20.8% of the samples showed parasitic forms. According to the percentage of reduction in the parasite load, it was found that for Trichuris vulpis, the anthelmintics febendazole + pyrantel embonate + praziquantel and praziquantel + fenbendazole were ineffective in 13.5% of the samples (n=5), febantel + praziquantel + pyrantel and febendazole + pyrantel embonate + praziquantel had low efficacy in 5.4% (n=2) and praziquantel + fenbendazole was moderately effective in 2.7% (n=1). For Ancylostomatidae, febendazole + pyrantel embonate + praziquantel and praziquantel + fenbendazole were ineffective in 6.8% (n=2) and febendazole + pyrantel embonate + praziquantel was also moderately effective in 3.3% (n=1). The overall and by parasite prevalences of thisstudy were not high when compared to others previously carried out in Portugal, however the parasitic forms identified are all recognizably or potentially zoonotic, in addition to causing animal disease. This study is the first to investigate anthelmintic resistance in intestinal parasites of dogs in Portugal and to identify ineffectiveness of anthelmintics for Trichuris vulpis and Ancylostomatidae. The low efficacy results obtained in few hosts do not suggest resistance of the intestinal parasite community, but may indicate deficient host metabolism, poor drug viability, reinfection, among other factors. Further studies should be carried out in the future to understand the extent of anthelmintic resistance.

Multimodal analgesia is the most widely accepted form for establishing an analgesic plan. This approach involves the administration of multiple analgesic agents, comprising systemic and regional analgesics. The metabolism and excretion of drugs in cats play a significant role in determining the selection, dosage, and intervals for analgesic administration. Therefore, the use of regional anesthesia techniques becomes particularly relevant in the analgesic management of cats. The presence of nociceptive stimuli induced by surgical procedures can lead to changes such as neuroplasticity and the onset of chronic pain. The use of regional anesthesia appears to be the most effective way to reduce nociceptive stimuli. Our primary objective was to investigate a regional anesthesia method, specifically the quadratus lumborum block (QLB), for providing analgesia during cranial and middle abdominal interventions in cats. For this purpose, studies were conducted to describe and assess the distribution in cadavers and the efficacy of QLB in female cats undergoing ovariectomy. In the initial phase, cat cadavers were used to comprehensively explore the sonoanatomy of the region and systematically identify the essential reference points for conducting the QLB. Following this, a ventrodorsal approach to QLB was established using a cadaveric model, involving the application of 0.4 ml kg-1 of a bupivacaine mixture with contrast and dye for characterization. After conducting computed tomography scans and anatomical dissection, the dispersion of the dye within the anatomical structures was assessed. Analysis revealed dispersion along the last ventral branches of the thoracic spinal nerves and the first three lumbar spinal nerves, as well as in the sympathetic trunk between T13 and L3, lumbar splanchnic nerves, and celiac ganglion. To explore alternative approaches, an assessment was made of a dorsoventral approach to the interfascial plane between the quadratus lumborum muscle and the psoas minor muscle in cat cadavers. It was demonstrated that this approach could be an alternative to the ventrodorsal approach, exhibiting a highly similar anatomical distribution. In terms of visualizing the needle trajectory during the block procedure, excellent visualization was observed in 10 out of 14 cases using the ventrodorsal approach, whereas in the dorsoventral approach, excellent visualization was observed in only 1 out of 14 cases (p = 0.0005). To evaluate analgesic efficacy in vivo, QLB was conducted in female cats undergoing ovariectomy. This study compared the analgesic effectiveness between a control group administered dexmedetomidine and methadone and another group receiving an additional bilateral QLB with 0.25% bupivacaine. The group that underwent QLB, exhibited a decrease in the number of intraoperative rescues, along with a notable reduction in opioid consumption during this period (p < 0.05). No significant differences were observed between the groups regarding hypotension. To evaluate the inhibition of sympathetic activity in cats undergoing ovariectomy, the Parasympathetic Tone Activity (PTA) monitor was utilized. This monitor allows assessing the balance between the sympathetic and parasympathetic systems, with values below 50 considered as sympathetic nervous system activation. The addition of the QLB resulted in a significant reduction (Fisher test p < 0.001) in PTA activation. At the evaluated points, PTA was activated in only 34.1% of the QLB group, whereas in the control group, activation occurred in 64.1% of the total evaluated points. Therefore, QLB may reduce sympathetic activation in cats undergoing ovariectomy. In our study, our aim was to conduct a comparative study with another regional technique, that has been described as effective and commonly used in cat ovariectomy procedures. In this context, a trans-operative comparison was made between the QLB and the sacrococcygeal epidural (ScE), using 0.25% bupivacaine for both techniques. Regarding intraoperative analgesic efficacy, no differences were observed between the evaluated groups. However, concerning intraoperative hypotension, a higher incidence of hypotension was noted in the ScE group (p = 0.031). During the postoperative period of this comparative study, no differences were noted in the Feline Grimace Scale classification. However, both the extubation time and occurrence of motor block were higher in the ScE group (p < 0.05). This study validated ultrasound reference points for performing the QLB in cats, establishing its anatomical distribution. Moreover, our findings suggest that this technique diminishes the necessity for intraoperative interventions in cats undergoing ovariectomies, subsequently reducing opioid consumption. Additionally, in the postoperative period, it seems to facilitate rapid anesthetic recovery, with minimal pain reported on the scale and no observed motor block. | Atualmente, a analgesia multimodal é a forma mais aceite para construção do plano analgésico. A analgesia multimodal envolve a administração de múltiplos agentes analgésicos, incluindo analgésicos sistémicos e regionais. O metabolismo e a eliminação de medicamentos em gatos influenciam significativamente a seleção, dosagem e intervalos de administração de medicamentos analgésicos. Deste modo, o uso de técnicas de anestesia regional torna-se particularmente relevante no maneio analgésico de gatos. A presença de estímulo nociceptivo induzindo pelos procedimentos cirúrgicos podem conduzir a alterações como a neuroplasticidade e o surgimento de dor crónica. O uso da anestesia regional parece ser a forma mais efetiva de reduzir os estímulos nociceptivos. Com o objetivo de encontrar uma solução de anestesia regional para analgesia em intervenções de abdómen cranial e médio em gatos, procedeu-se à descrição e avaliação do bloqueio quadrado lombar (QLB) em gatos. Para isso, foram realizados estudos com o intuito de descrever e avaliar a distribuição em cadáveres e eficácia do QLB em gatas submetidas a ovariectomia. Numa primeira fase do desenvolvimento deste trabalho, recorreu-se a cadáveres de gato para conhecer detalhadamente a sonoanatomia da região e identificar de forma clara e sistemática os pontos de referência necessários para a realização do procedimento do QLB. De seguida, recorrendo a um modelo cadavérico procurou-se caracterizar uma abordagem ventrodorsal ao QLB, com aplicação de 0.4ml kg-1 de mistura de bupivacaína com contraste e corante. Subsequentemente foram realizadas tomografias computorizadas e dissecção anatómica, de forma a avaliar a dispersão do corante pelas estruturas anatómicas. Após análise das tomografias e da disseção anatómica, observou-se uma dispersão pelos últimos ramos ventrais dos nervos espinais torácicos e pelos três primeiros lombares, bem como no tronco simpático entre T13 e L3, nervos esplâncnicos lombares e gânglio celíaco. Com vista a encontrar abordagens alternativas, foi avaliada, em cadáveres de gato, uma abordagem dorsoventral ao plano interfascial entre o músculo quadrado lombar e o psoas menor. Esta abordagem pode ser considerada uma alternativa à abordagem ventrodorsal anteriormente mencionada, uma vez que apresenta uma distribuição anatómica muito semelhante. Relativamente à visualização da trajetória da agulha durante a realização do bloqueio, esta foi observada de uma forma excelente em 10 de 14 na abordagem ventrodorsal, quando comparada com a abordagem dorsoventral, onde apenas se observou visualização excelente em 1 de 14 (p = 0.0005). Com o objetivo de avaliar a eficácia analgésica in vivo em gatas submetidas a ovariectomia, foi realizado um estudo que comparou a eficácia analgésica entre um grupo controlo, que recebeu dexmedetomidina e metadona, e um grupo no qual foi administrado adicionalmente um QLB bilateral com bupivacaína a 0,25%. No grupo em que o QLB foi realizado, observou-se uma redução do número de resgates intraoperatórios, com redução significativa do consumo de opióides durante esse período (p < 0,001) da ativação do PTA. Sendo que nos pontos avaliados, em apenas 34,1% foi ativado o PTA no grupo QLB, enquanto que no grupo controlo a ativação ocorreu em 64,1% dos pontos avaliados. Assim sendo, o QLB pode reduzir a ativação simpática das gatas submetidas a ovariectomia. No nosso trabalho pretendeu-se realizar um estudo comparativo com outra técnica regional, descrita como eficaz e comummente utilizada em ovariectomia de gatas. Neste sentido, foi realizada uma comparação trans-operatoria entre o QLB e a epidural sacrococcigea (ScE), com bupivacaina a 0,25%. Relativamente à eficácia analgésica intra-operatoria não foram observadas diferenças entre os grupos avaliados. No entanto, relativamente à hipotensão intraoperatória, a incidência de hipotensão foi mais frequente no grupo da ScE (p = 0,031). No período pós-operatório deste estudo comparativo, não foram observadas diferenças na classificação da escala Feline Grimace Scale, no entanto, o tempo de extubação e o bloqueio motor no grupo ScE foi superior (p < 0,05). Este trabalho permitiu a validação dos pontos de referência ecográficos do QLB em gatos, bem como caracterizar a sua distribuição. Além disso podemos concluir que esta técnica permite reduzir a necessidade de resgates durante o período intraoperatório em gatas submetidas a ovariectomias, com consequente redução do consumo de opoides. No período pós-operatório, parece promover uma rápida recuperação anestésica, com classificações de escalas de dor baixas e ausência de bloqueio motor.

Gastrointestinal parasites in livestock remain an ongoing concern in modern times leading to serious consequences regarding animal welfare and impacting farm profitability. The indiscriminate use of anthelmintic drugs to control gastrointestinal parasites in grazing cattle and sheep can lead to a crescent lack of efficacy and consequent resistance to anthelmintics. The detection of parasite eggs by performing fecal egg counts (FEC) and the determination of eggs per gram of feces (EPG) constitutes a crucial step to combat anthelmintic drug resistance as it allows farmers and veterinary doctors to apply targeted selective treatments (TST), treating only individuals that require treatment. Since its introduction in 1939, the McMaster technique and its many modifications, have been used to recover and count eggs of helminths and oocysts of intestinal protozoa. These methods, although effective, are laborious, consume substantial time, and require skilled staff to process the samples, visually detect and identify the parasite eggs. The use of recent technology, developed in the last 10 years, based on machine learning (ML), has enabled a faster identification of parasitic forms. The main aim of the present study is to compare the McMaster technique with the Micron Kit®, a rapid test system that uses artificial intelligence and an application for mobile devices, in determining FEC, present in feces of cattle and sheep. A total of 147 bovine and 43 ovine fecal samples were collected. Each sample was homogenised and split equally between two containers. One container per sample was processed using the Micron Kit®, the second container analysed using the McMaster technique. Strongylid type and Strongyloides egg counts were carried out via video footage of samples captured by the system’s ML and via the McMaster chamber. Results were statistically analysed using the analysis ToolPak from Microsoft® Excel® and the Kolmogorov–Smirnov, Shapiro-Wilk and Wilcoxon signed rank test calculator by Statistics Kingdom®.The differences of strongylid type and Strongyloides EPG counts between the two methods were statistically significant, with a significantly higher FEC using the Micron Kit® compared to the FEC using the McMaster technique. The automated system presents a promising alternative to the manual McMaster technique, yielding higher FEC results. It eliminates the necessity for specialized personnel and decreases turnaround time under 30 minutes, compared to the average time of 45 minutes for the McMaster chamber preparation and analysis. The Micron Kit® mobile application and online data storage allows monitoring of parasite trends across individual animals, farms, and different regions. Leveraging large-scale data collection capabilities could effectively combat anthelmintic resistance. | Os parasitas gastrointestinais nos animais de pecuária continuam a ser uma preocupação constante nos tempos modernos, acarretando sérias consequências para o bem-estar animal e afetando a rentabilidade das explorações agropecuárias. A utilização indiscriminada de fármacos anti-helmínticos para controlar os parasitas gastrointestinais em bovinos e ovinos em pastoreio pode conduzir a uma crescente falta de eficácia e consequente resistência aos anti-helmínticos. A deteção de ovos de parasitas através da contagem de ovos fecais (COF) e a determinação de ovos por grama de fezes (OPG), constitui uma etapa crucial para combater a resistência aos fármacos anti-helmínticos, permitindo aos produtores e médicos veterinários aplicar tratamentos seletivos direcionados, tratando apenas os indivíduos que necessitam de tratamento. Desde a sua introdução em 1939, a técnica de McMaster e as suas diversas modificações têm sido utilizadas para recuperar e contar ovos de helmintes e oocistos de protozoários intestinais. Estes métodos, embora eficazes, são trabalhosos, consomem tempo substancial e exigem pessoal qualificado para processar as amostras, detetar e identificar visualmente os ovos dos parasitas. A utilização de tecnologia recente, desenvolvida nos últimos 10 anos, baseada na “aprendizagem automática” (machine learning), tem permitido uma identificação mais rápida de formas parasitárias. O objetivo principal do presente estudo é comparar a técnica de McMaster com o Micron Kit®, um sistema de teste rápido que utiliza inteligência artificial e uma aplicação para dispositivos móveis, na determinação de COF presentes em fezes de bovinos e ovinos. Um total de 147 amostras de fezes bovinas e 43 amostras de fezes ovinas foram recolhidas. Cada amostra foi homogeneizada e dividida igualmente por dois recipientes. Um recipiente por amostra foi processado utilizando o Micron Kit®, enquanto o segundo recipiente foi analisado utilizando a técnica de McMaster. As contagens de ovos do tipo estrongilídeo e do género Strongyloides foram realizadas através de imagens de vídeo das amostras, captadas pelo sistema de “aprendizagem automática” do Micron Kit®, e através da câmara de McMaster. Os resultados foram analisados estatisticamente utilizando a ferramenta de análise ToolPak Microsoft® Excel® e a calculadora de teste de Kolmogorov-Smirnov, Shapiro-Wilk e Wilcoxon signed rank da Statistics Kingdom®. As diferenças nas contagens de OPG do tipo estrongilídeo e do género Strongyloides entre os dois métodos foram estatisticamente significativas, observando-se uma COF significativamente mais elevada através do Micron Kit® em comparação com a COF utilizando a técnica de McMaster. O sistema automatizado apresenta uma alternativa promissora à técnica manual de McMaster, produzindo resultados COF mais elevados. Elimina a necessidade de pessoal especializado e diminui o tempo de resposta para menos de 30 minutos, em comparação com o tempo médio de 45 minutos para a preparação e análise da câmara de McMaster. A aplicação para dispositivos móveis e armazenamento de dados online do Micron Kit® permite monitorizar as tendências de parasitas em animais individuais, explorações e diferentes regiões. O aproveitamento das capacidades de recolha de dados em larga escala pode ajudar a combater eficazmente a resistência aos anti-helmínticos.