Development of simultaneous determination of thiols, ascorbic acid and their oxidised forms using HPLC with electrochemical detection. Application to the study of the reaction catalyzed by GSH-DHA [glutathion, cysteine] oxidoreductase | Mise au point d'une methode HPLC avec detection electrochimique permettant le dosage simultane des thiols de l'acide ascorbique sous leurs formes reduites et oxydees
2000
Kaid, N. (Conservatoire National des Arts et Metiers, Paris (France). Chaire de Biochimie Industrielle et Agro Alimentaire) | Potus, J. | Nicolas, J.
Francés. Une methode HPLC rapide et sensible a ete mise au point pour le dosage simultane de l'acide ascorbique (AA), du glutathion (GSH) et de la cysteine (CSH) en vue de l'appliquer aux pates de farine de ble. La detection electrochimique utilisee permet le dosage des thiols sous leur forme native (sans derivation). La phase mobile est constituee par une solution de dihydrogenophosphate d'ammonium (100 mM) ajustee a pH 2,8 par l'acide o-phosphorique. La premiere electrode de mesure dont le potentiel est fixe a 0,6 V permet le dosage de AA alors que la seconde fixee a un potentiel de 1,05 V permet celui des thiols. Les limites de detection sont de 5 et 10 pmoles injectees pour CSH et GSH et de 1 pmole injectee pour AA, respectivement. Les formes oxydees de ces composes sont quantifiees par la meme technique HPLC apres traitement de l'echantillon par le dithiothreitol. Cette methode a ete appliquee a un milieu contenant GSH,CSH et de l'acide dehydroascorbique (DHA) auquel a ete ajoutee une preparation purifiee de GSH-DHA oxydoreductase. L'analyse du milieu reactionnel apres action de l'enzyme a permis de mettre en evidence la formation simultanee des formes oxydees du glutathion (GSSG), de la cysteine (CSSC), mais aussi du disulfure mixte GSSC
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Información bibliográfica
Este registro bibliográfico ha sido proporcionado por National Institute for Agricultural Research