Hen egg-yolk antibody for detection of protein markers of tapping panel dryness in rubber trees

Inglés. Yield loss due to tapping panel dryness (TPD) in rubber plantations is economically important because there is no latex flow when the trees are tapped. The development of tools for early detection of TPD incidence is necessary for preventing this physiological disorder. The purpose of the present work was to identify and characterize the changes of protein expression in latex C-serum associated with TPD incidence and to produce the IgY antibodies which could be applied for early detection of TPD in rubber trees. The protein banding patterns of latex C-serum of four clones from healthy trees were compared with those of TPD trees either by two-dimensional (2-D) or SDS-PAGE electrophoresis on polyacrylamide gel. Polyclonal antibodies (IgY) produced in egg-yolk of laying hen were prepared against C-serum protein of normal trees and used for ELISA and immunoblotting detection. Native-IEF and 2-D electrophoresis analysis of latex C-serum revealed the existence of several differential protein expression between normal and TPD trees. Three specific proteins observed only in the C-serum of normal trees were 40 kDa (pI 5.1), 20 kDa (pI 4.2), and 29 kDa (pI 5.0). Conversely, several proteins were accumulated in response to TPD incidence i.e., proteins with molecular weight between 14.5-18.0 kDa (pI 5.2-5.4) and 17 kDa (pI 4.6). An indirect-ELISA showed that IgY antibody produced in egg-yolk of laying hens was more reactive against C-serum of normal trees than TPD trees, suggesting that this IgY could be used for early detection of TPD incidence. As observed in SDS-PAGE protein blots, IgY reacted specifically with single protein at 66 kDa and interestingly in native IEF reacted with two protein bands at pI 5.1 and 5.3 of latex C-serum of normal trees but did not react with proteins of TPD trees

desconocido. Kehilangan produksi lateks sebagai akibat gangguan kekeringan alur sadap (KAS) di perkebunan karet merupakan masalah penting selama pohon yang disadap tidak mengalirkan lateks. Pengembangan suatu perangkat uji untuk deteksi dini gejala KAS diperlukan untuk dapat membantu menghindarkan gangguan fisiologis tersebut. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengidentifikasi dan mengkarakterisasi perubahan ekspresi protein dalam serum C lateks yang berasosiasi dengan gejala KAS serta untuk memproduksi antibodi IgY yang dapat diterapkan sebagai perangkat deteksi KAS tanaman karet. Pola pita protein dari serum C pada 4 klon tanaman sehat dibandingkan dengan pada tanaman KAS baik secara elektroforesis dua dimensi (2-D) atau SDS-PAGE pada gel poliakrilamida. Antibodi poliklonal (IgY) anti protein serum C pohon normal diproduksi dalam kuning telur dari ayam petelur dan digunakan untuk deteksi ELISA dan imunobloting. Analisa IEF-natif dan elektroforesis dua dimensi dari serum C lateks membuktikan adanya beberapa perbedaan ekspresi protein dalam serum C lateks antara pohon normal dengan pohoh KAS. Tiga protein spesifik hanya terdeteksi pada serum C pohon normal yaitu dengan berat molekul (BM) 40 kDa (pI 5,1), 20 kDa (pI 4,2), dan 29 kDa (pI 5,0). Sebaliknya beberapa protein terakumulasi sebagai respon terhadap gejala KAS yaitu protein dengan berat molekul antara 14,5-18,0 kDa (pI 5,2-5,4) dan 17 kDa (pI 4,6). Hasil ELISA tidak langsung menunjukkan bahwa antibodi IgY yang diproduksi dalam kuning telur dari ayam petelur terbukti lebih reaktif terhadap serum C pohon normal daripada pohon KAS. Hal ini menunjukkan bahwa IgY tersebut dapat digunakan untuk deteksi dini gejala KAS. Seperti yang teramati pada hasil bloting protein SDS-PAGE. IgY bereaksi secara spesifik dengan protein tunggal pada 66 kDa sedangkan pada kondisi IEF-natif, antibodi tersebut bereaksi dengan dua pita protein pada 5.1 dan 5.3 dari serum C lateks pohon normal, namun tidak bereaksi dengan protein pohon KAS