Reactive oxygen species generation and B14 cells morphological transformations under oxidative treatment induced by organic hydroperoxide

Inglés. The aim of the realized research is to determine the biochemical regularities of the oxidative processes induced by tBHP in mammalian cells. We used tBHP (Sigma-Aldrich GmbH, Germany), fluorescent probe 2 &#039

Цель настоящей работы – определение биохимических закономерностей окислительных процессов, индуцируемых tBHP, в клетках млекопитающих. В работе использовали tBHP (Sigma-Aldrich GmbH, Германия), флуоресцентный зонд 2′,7′-дихлородигидрофлуоресцеин диацетат (DCFH-DA) (Molecular Probes, Inc., США), а также другие реактивы аналитической степени чистоты (POCH, Польша). Окислительный стресс, индуцируемый в клетках линии В14 органическим терт-бутил гидропероксидом (tBHP), приводит к генерации в клетке свободных радикалов в реакциях гидропероксида с гемсодержащими белками. Рассчитана эффективная полумаксимальная концентрация tBHP в реакции активации окислителя клетками: EC50 = 37 +/- 12 мкМ. Определяемые метаболической активностью клетки окислительные процессы приводят к выраженному нарушению морфологии клеток: потере ими способности сорбироваться на субстрате и формировать ассоциаты, а затем к набуханию клеток и лизису, что отражает некротический механизм гибели клеток при окислительном воздействии. Деполяризация и набухание клеток отражают формирование ион-неселективных пор в мембране и некротический механизм гибели клеток при окислительном воздействии.

Ruso. , 7&#039

-dichlorohydrofluorescein diacetate (DCFH-DA) (Molecular Probes, Inc., USA), as well as other reagents of analytical purity (POCH, Poland). Oxidative stress induced in B14 cells by organic tert-butyl hydroperoxide (tBHP) results in intracellular free radical generation in hydroperoxide reactions with haem–containing proteins. The half maximal effective concentration of tBHP in reaction with cellular components EC50 is equal to 37 +/- 12 mkM. Oxidative processes depends on cell metabolic activity and induces cell morphological impairments: cell detachment from the substrate, cell dissociations and swelling, which reflects necrotic mechanism of oxidative cell death. Depolarization and swelling of cells reflect the formation of ion-nonselective pores in the membrane and the necrotic mechanism of cell death during oxidative exposure.