Histogram score contributes for rellability of DNA content estimatives in Brachiaria spp.

ABSTRACT - Flow cytometry allows to estimate the DNA content of a large number of plants quickly. However, inadequate protocols can compromise the reliability of these estimates leading to variations in the values of DNA content the same species. The objective of this study was to propose an efficient protocol to estimate the DNA content of Brachiaria spp. genotypes with different ploidy levels using flow cytometry. We evaluated four genotypes (B. ruziziensis diploid and artificially tetraploidized; a tetraploid B. brizantha and a natural triploid hybrid), three buffer solutions (MgSO4, Galbraith and Tris-HCl) and three species as internal reference standards (Raphanus sativus, Solanum lycopersicum e Pisum sativum). The variables measured were: histogram score (1- 5), coefficient of variation and estimation of DNA content. The best combination for the analysis of Brachiaria spp. DNA content was the use of MgSO4 buffer with R. sativus as a internal reference standard. Genome sizes expressed in picograms of DNA are presented for all genotypes and the importance of the histogram score on the results reliability of DNA content analyses were discussed. RESUMO - A citometria de fluxo permite estimar o conteúdo de DNA de um grande número de plantas rapidamente. No entanto, protocolos inadequados podem comprometer a confiabilidade dessas estimativas, levando a variações nos valores de conteúdo de DNA para uma mesma espécie. Neste trabalho, objetivou-se propor um protocolo eficiente para a estimativa do conteúdo de DNA de genótipos de Brachiaria spp. com diferentes níveis de ploidia, utilizando a citometria de fluxo. Foram avaliados quatro genótipos (B. ruziziensis, diploide e tetraploidizada artificialmente; B. brizantha tetraploide e um híbrido natural triploide), 3 soluções tampões (MgSO4, Galbraith e Tris-HCl) e três espécies como padrões de referência interno (Raphanus sativus, Solanum lycopersicum e Pisum sativum). As variáveis mensuradas foram: nota do histograma (1 a 5), coeficiente de variação e estimativa do conteúdo de DNA. A melhor combinação para as análises do conteúdo de DNA de Brachiaria spp. por citometria de fluxo foi o emprego do tampão MgSO4 com o rabanete como padrão de referência. O tamanho dos genomas expresso em picogramas de DNA foi apresentado para todos os genótipos e a importância da pontuação do histograma na confiabilidade dos resultados das análises do conteúdo de DNA foi discutida.