Biolistic transformation of sorghum using a rice chitinase gene [Sorghum bicolor (L.) Moench - Oryza sativa L.]

Inglés. A rice chitinase gene, G11, which may have a protective role against fungal pathogens, was introduced into a sorghum inbred "Tx430". Calli derived from immature zygotic embryos were bombardaded with tungsten particles coated with a plasmid DNA containing this gene and the bar gene as a selectable marker. After transformation, six fertile transgenic plants were obtained from a total of 1,100 bombarded calli. Molecular analyses by phosphinothricin acetyltransferase (PAT) acitivity assay, Southern blotting, and western blotting confirmed the presence and expression of the selectable bar gene and the rice chitinase gene in primary transgenic plants (T0). However, gene silencing occurred in few T0 plants at certain growth stages. Progeny analysis showed that the introduced chitinase gene was inherited and segregated among T1 plants (progeny of selfed T0 plants). Western blot analysis showed a 3:1 Mendelian segregation of the rice chitinase gene in T1 progeny, suggesting that the active chitinase gene(s) was inserted in a single locus in the T0 plants

Italiano. [Un gene della chitinasi del riso, G11, che puo' avere un ruolo protettivo contro i patogeni fungini, e' stato introdotto in una linea consanguinea di sorgo, Tx430. I calli ottenuti da embrioni zigotici immaturi sono stati bombardati con particelle di tungsteno rivestite di un plasmidio di DNA contenente questo gene e il gene bar come marcatore selezionabile. Dopo la trasfromazione, da un totale di 1,100 calli bombardati sono state ottenute sei piante transgeniche fertili. Le analisi molecolari, effettuate con il saggio dell'attivita' della fosfinotricina acetiltrasferasi (PAT), con Southern blotting e western blotting, hanno confermato la presenza e l'espressione del gene selezionabile bar e del gene della chitinasi del riso nelle piante transgeniche primarie (T0). Comunque, si verificava un'inattivazione del gene in alcune piante T0 a certi stadi di crescita. L'analisi della progenie ha evidenziato che il gene della chitinasi introdotto veniva ereditato e segregava nelle piante T1 (progenie di piante T0 autofecondate). L'analisi western blot ha messo in luce una segregazione mendeliana 3:1 del gene della chitinasi del riso nella progenie T1, fornendo l'evidenza che il(i) gene(i) attivo(i) della chitinasi era inserito in un locus singolo nelle piante T0]