Évaluation d’une suite de bio-essais pour la détection et l’étude de composés lipophiles de micro-organismes marins issus de mollusques bivalves et de leur environnement

The context of this study was the assessment of the safety of edible bivalve molluscs. Bivalve can indeed accumulate high concentrations of phycotoxins into their hepatopancreas, potentially leading to human intoxication outbreaks after consumption of such contaminated bivalves. In order to ensure the protection of shellfish consumers, regulated toxins are monitored using physico-chemical techniques. In parallel, emerging toxins, that can be putatively produced by microalgae or marine fungi, are monitored using the intraperitoneal mouse bioassay. However, this bioassay suffers ethical and methodological drawbacks. Thus, the objective of this work was to assess the ability of a bioassay suite to detect lipophilic toxins. This suite was composed of three types of assays: cytotoxicity on KB cells, a bioassay on diptera larvae and antibacterial activity on marine bacteria. These bioassays were first adapted to routine protocols, subsequently their detection perimeter was evaluated at different levels of matrix complexity: known or emerging pure toxin, crude extract of microorganisms producing the toxin, and spiked shellfish matrices. These three bioassays exhibited a complementary scope of detection, and an approach for their implementation was proposed.

Ce travail de thèse s’est inscrit dans un contexte d’évaluation de la salubrité des mollusques bivalves de consommation. Ces organismes peuvent en effet accumuler dans leur glande digestive des phycotoxines en concentrations importantes, pouvant induire des intoxications chez les personnes consommant ces bivalves contaminés. Afin d’assurer la protection des consommateurs, les toxines réglementées sont recherchées dans les coquillages par techniques physico-chimiques. En parallèle, les toxines émergentes, potentiellement produites par d’autres organismes que les micro-algues tels que les micromycètes, peuvent être surveillées par l’utilisation du test de toxicité aigüe sur souris. Cependant, ce bio-essai présente de très nombreux inconvénients, notamment éthiques et méthodologiques. Ainsi, l’objectif de ce travail était d’étudier la capacité d’une suite de bio-essais alternatifs à détecter des toxines lipophiles. Cette suite consistait en trois types de tests : cytotoxicité sur cellules KB, activité sur larves de diptères, et activités antibactériennes sur bactéries marines. Ces tests ont dans un premier temps été adaptés à des protocoles de routine, puis leur périmètre de détection a été évalué à différents niveaux de complexité de la matrice : toxine lipophile pure connue ou émergente, extrait brut de micro-algue ou micromycète producteur de toxine, et matrices de bivalves dopées. Les trois tests se sont révélés être complémentaires dans leurs champs de détection, et une démarche pour leur mise en place a pu été proposée.