Estandarización de la técnica de electroforesis en gel de células individuales (scge) para evaluar alteraciones en el ADN del ostión japonés Crassostrea gigas (Thunberg, 1873)

El incremento en la contaminación ambiental a hecho necesario el desarrollo de nuevas metodologías que permitan evaluar su impacto sobre los seres vivos. La técnica de electroforesis en gel de células individuales (SCGE) representa una excelente alternativa en la detección de daño en el material genético. Las principales ventajas de este método son su sensibilidad, rapidez y bajo costo. En genotoxicología de mamíferos las guías para el uso de la SCGE han sido definidas, mientras que en el caso de invertebrados marinos los protocolos no han sido bien estandarizados. La principal dificultad al utilizar esta metodología en trabajos ambientales es la comparación de los resultados entre diferentes grupos de investigación, es por ello que la estandarización de la técnica SCGE es necesaria para poder establecer un biomarcador estándar en ambientes marinos. Crassostrea gigas es una especie de gran importancia comercial y gracias a sus características sésiles y filtradoras puede ser utilizada como un organismo centinela o bioindicador de la calidad ambiental. Al ser C. gigas muy estudiada, su empleo en la determinación de un biomarcador de daño genotóxico permitirá interpretar desde varios aspectos su comportamiento o respuesta ante determinados estímulos ambientales. El principal objetivo del presente trabajo fue la estandarización de la técnica SCGE para evaluar alteraciones en el ADN del ostión japonés Crassostrea gigas. Para cumplir con los objetivos propuestos se probó la viabilidad celular y genotoxicidad en varios procedimientos en 4 tejidos (hemolinfa, glándula digestiva, manto y branquia). En este sentido, uno de los primeros logros fue determinar a la hemolinfa como el tejido mas representativo del daño presente en el organismo para lo cual se recurrió al uso de un inductor de rompimientos de cadena sencilla del ADN. Así mismo se realizaron diferentes análisis comparando el daño ocasionado en los tejidos de interés y tratamientos y condiciones metodológicas, estableciéndose su validez estadística a través de las pruebas ANOVA y Tukey. La estandarización de la técnica de electroforesis en gel de células individuales en C. gigas permitirá el desarrollo de futuros estudios para la evaluación de la calidad ambiental en el Golfo de California.

The increase of the environmental pollution, makes necessary the development new methodologies to evaluate its impact on the living organisms. The Single Cell Gel Electrophoresis (SCGE) assay represents an excellent alternative for the detection of DNA-damage in different organisms. The main advantages of this method are its sensitivity, rapidity and low cost. In genotoxicology of mammals the guidelines for the use of the SCGE have been defined, whereas in the case of marine invertebrates the protocols are not standardized. The main difficulty using this approach in environmental works is the comparison of results between different research laboratories, for this reason the standardization of this assay is necessary in order to establish a standard biomarker for the marine environment. Crassostrea gigas is a species of great commercial importance and as they are sessile and filter-feeders can be used like an organism sentry or bioindicator of environmental quality. C. gigas has been extensively studied and its use as biomarker of genotoxic damage will allow understand the effects of certain environmental stimuli. The main objective of the present work was the standardization of SCGE assay to evaluate alterations in DNA of the japanese oyster Crassostrea gigas. The cellular viability and genotoxicity was evaluated under several procedures, in four tissues (hemolymph, digestive gland, mantle and gill). One of the main results was to determination of hemolymph as the representative tissue of the damage in the organism, for this motive we employed an inducer of DNA single strand breaks. Different analyses were performed comparing the damage on the four tissues, treatments and methodologic conditions, settling down their statistical validity through the ANOVA and Tukey tests. Standardization of SCGE assay in C. gigas will allow future studies for the evaluation of the environmental quality in the Gulf of California.