Prototipo de una nanovacuna oral utilizando el epítope Ta2 de la toxina A de Vibrio parahaemolyticus en leucocitos de pez

"El uso de nanopartículas en Vacunología ha aumentado en los últimos años debido a su capacidad para estimular o suprimir las respuestas inmunitarias. En este contexto, las nanopartículas de oro (AuNPs) han sido ampliamente investigadas para tratar múltiples padecimientos. Las AuNPs se han empleado para tratar desde cáncer hasta enfermedades causadas por virus o bacterias, como es el caso de Vibrio parahaemolyticus. La bacteria marina V. parahaemolyticus es responsable de causar vibriosis en camarones y peces. Recientemente V. parahaemolyticus adquirió un plásmido (plásmido pVA). El plásmido pVA posee una toxina binaria (Toxina A y Toxina B) y está asociado al Síndrome de la Necrosis Aguda del Hepatopáncreas. Un estudio, realizado en nuestro grupo de investigación, encontró que la Toxina A posee propiedades inmunomoduladoras y protectoras contra V. parahaemolyticus. Siguiendo esta línea de investigación, un sistema basado en AuNPs y epítopes de la Toxina A representa una potencial nanovacuna oral en peces. En este trabajo, un epítope de la Toxina A (Ta2) se adsorbió sobre la superficie de AuNPs por medio de interacciones electrostáticas (AuNPs-Ta2). Este sistema fue caracterizado mediante DLS, potencial Z, espectrofotometría UV-vis y Microscopía Electrónica. Además, su citotoxicidad y su potencial como inmunoestimulante, se evaluó en pruebas in vitro en leucocitos de bazo de pez (Seriola rivoliana). AuNPs-Ta2 no mostró citotoxicidad en células expuestas a concentraciones de 5.1 y 10.1 nM (con respecto a AuNPs). Se analizó la actividad de enzimas asociadas a la respuesta inmune (fagocitosis, superóxido dismutasa, catalasa, mieloperoxidasa, explosión respiratoria, óxido nítrico). Se encontraron diferencias significativas en la actividad catalasa y mieloperoxidasa de los leucocitos estimulados con el prototipo de la nanovacuna con respecto al control. El conocimiento sobre la inmunomodulación en las mucosas por AuNPs modificadas con subunidades permitirá elucidar las células, mecanismos (inductores, reguladores y efectores) y actividades funcionales. Esto contribuye al conocimiento para la manipulación del sistema inmune de las mucosas en modelo de pez. "

"Nanoparticles possess the ability to stimulate or suppress immune responses. In this context, gold nanoparticles (AuNPs) have been extensively investigated to treat multiple conditions. AuNPs show the potential to treat from cancer to diseases caused by viruses or bacteria, such as Vibrio parahaemolyticus. V. parahaemolyticus is a marine bacterium responsible of vibriosis in shrimp and fish. Recently, V. parahaemolyticus acquired a plasmid (plasmid pVA). Plasmid pVA encodes a binary toxin (Toxin A and Toxin B), which was associated with the acute hepatopancreatic necrosis disease. Our research group demonstrated that Toxin A in fish had immunomodulatory and protective effects against V. parahaemolyticus. Following this line of research, a system based on AuNPs and Toxin A peptides represents a potential oral nanovaccine in fish. In this study, a system of an epitope of Toxin A (Ta2) adsorbed onto the surface of AuNPs through electrostatic interactions (AuNPs-Ta2) was characterized by DLS, Z potential, UV-vis spectrophotometry, and Electron Microscopy. Furthermore, the AuNPs-Ta2 cytotoxicity and the immunostimulant effects were evaluated. In vitro tests were performed on fish spleen leukocytes (Seriola rivoliana). AuNPs-Ta2 showed no cytotoxicity in cells exposed to concentrations of 5.1 and 10.1 nM (concerning AuNPs). The activity of enzymes associated with the immune response (phagocytosis, superoxide dismutase, catalase, myeloperoxidase, respiratory explosion, nitric oxide) was analyzed. Stimulated leukocytes with AuNPs-Ta2 increased significantly the activity of catalase and myeloperoxidase for the control. Knowledge of immunomodulation in the mucosa by subunit-modified AuNPs will allow elucidating cells, mechanisms (inductors, regulators and effectors) and functional activities, as a basis for the manipulation of the mucosal immune system in a fish model."