Análise morfológica e molecular de corpo lúteo de fêmeas suínas gestantes | Morphological and molecular analysis of corpus luteum in pregnant pigs

O entendimento dos mecanismos que controlam a permeabilidade, a angiogênese e a apoptose do corpo lúteo das fêmeas suínas gestantes é essencial para a compreensão do papel fisiológico destes processos na produção de progesterona e consequentemente no desenvolvimento do concepto, nas taxas de mortalidade pré-natal e na prolificidade dos animais. Assim, objetivou-se com este estudo avaliar a expressão de genes relacionados à angiogênese e a apoptose do corpo lúteo de fêmeas suínas gestantes da raça local Piau e linhagem Comercial, em diferentes idades gestacionais, além de relacionar os dados moleculares aos dados fenotípicos de morfologia do corpo lúteo gestacional. Para a análise histológica, as amostras foram incluídas em resina plástica e coradas em Azul de Toluidina. Já para a análise molecular do corpo lúteo, a extração do RNA total foi realizada com Trizol® e a expressão gênica avaliada mediante a técnica de PCR quantitativa em tempo real (RT-qPCR). Foram observadas diferenças entre as idades gestacionais (P=0,0043) na avaliação morfológica do corpo lúteo, onde aos 90 dias o número médio de vasos/capilares sanguíneos foi maior do que aos sete dias de gestação pelo teste de Tukey (P<0,05). A interação entre grupo genético e idade gestacional foi significativa ao se analisar a expressão dos genes angiogênicos MMP9 (P=0,0463), VEGFA (P=0,0078) e ANGPT1 (P<0,0001). A interação entre grupo genético e idade gestacional também foi significativa ao se analisar a expressão de todos os genes apóptoticos trabalhados: BAX (P<0,0001), BCL-2 (P<0,0001) e CASP3(P=0,0330). Os genes angiogênicos HIF1α, MMP2, VEGFR-2 apresentaram maior expressão em fêmeas de linhagem Comercial em relação à Piau (P=0,0495, P=0,0210 e P=0,0304, respectivamente). Já os genes ANGPT2 (P=0,3260 e P=0,0511) e o receptor TEK (P=0,5273 e P=0,8827) não apresentaram diferenças de expressão entre grupos genéticos e idades gestacionais. A razão entre ANGPT2 e ANGPT1, que competem pelo mesmo receptor (TEK), apresentou variação entre as idades gestacionais tanto em fêmeas da raça Piau (P=0,0001) quanto em fêmeas de linhagem Comercial (P=0,0106). O padrão de expressão tanto de alguns genes angiogênicos quanto apoptóticos, foi influenciado pelas diferentes concentrações de progesterona sintetizada pelo corpo lúteo nos diferentes momentos gestacionais, e também pelos diferentes processos decorrentes do reconhecimento gestacional e desenvolvimento pré-natal dos conceptos. Diferenças entre grupos genéticos possivelmente foram verificadas como resultado da seleção de características voltadas a prolificidade das matrizes suínas de linhagens comerciais, que levaram às alterações na expressão gênica e consequentemente na morfologia do corpo lúteo.

Understanding the mechanisms which control the permeability, angiogenesis and corpus luteum apoptosis of pregnant sows are essential to comprehend the physiological role of these processes in progesterone production and consequently in conceptus development, embryonic and fetal mortality rates and prolificacy of the animals. The aim of this study was to evaluate the expression of genes related to angiogenesis and corpus luteum apoptosis of pregnant local breed Piau and Commercial line sows at different gestational ages, and associate the molecular data to phenotypic data of gestational corpus luteum morphology. For histological analysis, samples were embedded in plastic resin and stained with Toluidine Blue. As for the molecular analysis of the corpus luteum, total RNA extraction was performed using Trizol and gene expression measured by quantitative real time PCR (RT-qPCR). Diferences were observed in corpus luteum morphology between gestational ages (P=0.0043), which at 90-day average of vessels/blood capillaries was greater than the seventh day of pregnancy by Tukey test (P<0.05). The interaction between genetic group and gestational age was significant when analyzing the expression of MMP9 (P=0.0463), VEGFA (P=0.0078) and ANGPT1 (P<0.0001) genes. The interaction between these factors was also significant while analyzing the expression of all used apoptotic genes: BAX (P<0.0001), BCL-2 (P <0.0001) and CASP3 (P=0.0330). The angiogenic genes HIF1α, MMP2, VEGFR-2 showed higher expression in Commercial line than in local breeed Piau (P=0.0495, P=0.0210 and P=0.0304, respectively). On the other hand, ANGPT2 gene (P=0.3260 and P=0.0511) and the TEK receptor (P=0.5273 and P=0.8827) did not show differences in expression between the different genetic groups and gestational age. The ratio of ANGPT2 and ANGPT1, which compete for the same receptor TEK, showed significant variation between gestational ages for both genetic group Piau (P=0.0001) and Commercial (P=0.0106). The expression pattern of both angiogenic and apoptotic genes was affected by different concentrations of progesterone synthesized by the corpus luteum in different gestational periods, and also by different events in the gestational recognition and prenatal development of fetuses. Differences between genetic groups were found, possibly as a result of traits selection aimed to prolificacy of Commercial lines sows, which led to changes in the pattern of gene expression, hence in corpus luteum morphology.

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