Criopreservación del esperma del abulón azul Haliotis fulgens: Efecto de los crioprotectores y la tasa de enfriamiento en la viabilidad espermática | Sperm cryopreservation of green abalone Haliotis fulgens: The effect of the cryoprotectant and the freezing rate on sperm viability

El abulón azul (Haliotis fulgens) es una especie endémica de las costas del Pacífico de la península de Baja California y de California que constituye una pesquería económicamente importante a nivel nacional e internacional, que actualmente es considerada una especie amenazada. La criopreservación de esperma es una herramienta útil en la industria de la acuicultura que puede ayudar en la producción y conservación de recursos genéticos tanto en especies cultivadas como en peligro de extinción. El presente trabajo tuvo como objetivo evaluar el efecto de la conservación a corto plazo en refrigeración (4 °C) y desarrollar un protocolo de criopreservación para el esperma del abulón azul. En el almacenamiento a corto plazo se evaluó la motilidad espermática y se determinó que el esperma puede mantener una motilidad >40% al tercer día de almacenamiento. Para el experimento de criopreservación se evaluaron cuatro crioprotectores: dimetilsulfóxido (DMSO), propilenglicol (PG), glicerol (GLY) y metanol (MeOH) a cuatro concentraciones (5%, 10%, 15% y 20%) y cuatro tiempos de incubación (5, 10, 15 y 20 min). El congelamiento se llevó a cabo utilizando una cámara de congelamiento manual a una tasa de -30 °C por 10 min. Para determinar la calidad del esperma descongelado se evaluó la motilidad y viabilidad de las células. La motilidad fue evaluada estimando el porcentaje de esperma móvil en los diferentes tratamientos. Para determinar la viabilidad espermática se utilizó el kit LIVE/DEAD Sperm Viability. En el experimento de criopreservación se encontraron diferencias significativas en la selección del crioprotector. La máxima motilidad (48 ± 4.7%) y viabilidad (62 ± 8.8%) se obtuvieron al suspender el esperma en 15% de DMSO durante 5 min. Mientras que el uso de PG, GLY y MeOH mostró una motilidad < 5% en todos los tratamientos. Posteriormente se realizó un protocolo de optimización utilizando 12%, 15% y 18% de DMSO durante 8 y 18 min de incubación. Sin embargo, no se encontraron diferencias significativas en la motilidad y viabilidad espermática. Por lo tanto, el mejor tratamiento para congelar esperma del abulón azul fue DMSO al 15%.

Green abalone, Haliotis fulgens, is an endemic species of the Pacific coasts of California and the peninsula of Baja California considered a high-commercial value product at national and international levels. Cryopreservation of sperm of aquatic species can be helpful in the aquaculture industry and the conservation of genetic resources for culture and endangered species. This study aimed to evaluate the effect of short-term storage in refrigeration (4 ° C) and to develop a cryopreservation protocol for sperm of green abalone. For short-term storage, sperm motility was evaluated, and it was determined that sperm could maintain > 40% motility on the third day of storage. For the cryopreservation experiment, four commonly used cryoprotectants were evaluated: dimethyl sulfoxide (DMSO), propylene glycol (PG), glycerol (GLY), and methanol (MeOH) at four concentrations (5%, 10%, 15%, and 20%) and four equilibration times (5, 10, 15 and 20 min). Then the sperm was frozen using a manually controlled styrofoam chamber at -30 ° C for 10 min. Sperm quality was estimated as the percentage of motile sperm; to determine the plasma membrane integrity the LIVE / DEAD Sperm Viability kit was used. In the cryopreservation experiment, significant differences were found in the selection of the cryoprotectant. The highest motility (48 ± 4.7%) and viability (62 ± 8.8%) were found using sperm suspended in 15% DMSO for 5 min. Sperm cryopreserved with PG, GLY and MeOH showed the lowest motility <5% in all treatments. An optimization protocol was carried out using 12%, 15%, and 18% DMSO during 8 and 18 min of equilibration. However, no significant differences were found in sperm motility and viability. Therefore, the best treatment for sperm cryopreservation of green abalone is 15% DMSO. The use of cryopreserved sperm from green abalone provides an alternative breeding option for culture for this species.