DETERMINATION BY REAL TIME PCR OF Escherichia coli ON PUBLIC FAST FOOD | Determinación por pcr en tiempo real de escherichia coli en muestras de comida rápida

Inglés. Using Real Time PCR an microbiology methods we analyzed several food samples expended in streets around Universidad Politécnica Salesiana, Sede El Girón in search for the bacteria Escherichia coli. We selected three fast food restaurants, which were identified as the most important and popular for the community of students from nearby universities. To achieve a reliable statistical analysis were analyzed approximately 15 samples for each food establishment using different products. We developed a protocol for the quantification of samples, using a standard curve for E. coli. Microbiological analyzes were performed by a conventional standard method for cultivation in specific media (EMB, McKonkey) and the real-time PCR with specific primers using the Kit FS LC DNA Master PLUS ˆ HY-Pb, 96 react. (Roche Diagnostics). Through real time PCR we isolated E. coli in all the samples (100 % sucess), whereas using the conventional method we detected E. coli in only 53.36 % of the analyzed food. Chi-square (? 2 ) test showed statistical significance between both techniques. The molecular technique revealed a 100 % of positive E. coli cases in the analyzed fast food in all three establishments, whereas through the conventional method we identified E. coli in: 40 % of the hambuerguer samples, 66.7 % of the shawarma samples and 53.3 % of the skewers. We also observed differences in the speed each technique requires to show results: real Time PCR is much more sensitive, rapid and specific compared to the conventional method of cell culture. We quantified the amount of DNA in each sample through a standard E. coli curve.

Español; castellano. En la presente investigación se analizaron muestras de alimentos expendidos en las calles aledañas a la Universidad Politécnica Salesiana, Sede El Girón y se determinó la presencia de Escherichia coli mediante la técnica de PCR en Tiempo Real con una comprobación microbiológica en tres establecimientos de comida rápida más concurridos por la comunidad de estudiantes de las Universidades cercanas. Para lograr un análisis estadístico confiable, se analizaron alrededor de 15 muestras de alimentos por cada uno de los establecimientos con diferentes productos. Se elaboró un protocolo para la cuantificación de la muestras, utilizando una curva estándar para E. coli. Los análisis microbiológicos se realizaron por un método estándar convencional por cultivo en medios específicos (EMB, Mckonkey) y la PCR en tiempo real con un diseño de primers específicos y el kit de LC FS DNA MasterˆPLUS HY-Pb, 96 react. (Roche Diagnostics). Con la PCR se aisló E. coli en el 100 % de las muestras, mientras que por el método convencional se detectó tan solo el 53,36 %. La prueba de ?2 mostró significancia estadística entre ambas técnicas. El método molecular reveló un total de 100 % de casos positivos en los alimentos expendidos en los tres establecimientos de comida rápida que presentaron mayor contaminación por E.coli, mientras que a través del método convencional se obtuvieron en: hamburguesas 40 %, shawarmas 66.7 % y pinchos 53.3 % de casos positivos respectivamente. Se observó además diferencias con respecto al tiempo empleado por cada una de las técnicas: la PCR permite obtener resultados mucho más sensibles, rápidos y específicos, en comparación con el método convencional de cultivos celulares. Mediante la curva estándar se logró cuantificar la cantidad de ADN en cada muestra.