Preservação de plasma rico em plaquetas de coelhos em nitrogênio líquido e freezer

Platelet rich plasma (PRP) is a blood by-product obtained from centrifugations and subsequent separation of blood elements. Platelets are responsible for the production and release of factors that favor the repair of different tissues. This study aimed to compare and evaluate the viability of PRP after freezing and cryopreservation. Twelve healthy adult New Zealand rabbits were used to collect 12 mL of blood from each animal through cardiac puncture. Centribio centrifuge with 14 cm in diameter was used for the freezing protocol, and Centurion Scientific K3 Series cold centrifuge at 4 ° C 18 cm in diameter was used for the nitrogen preservation protocol. For both protocols, two centrifugations were done at 2000 rpm for 20 minutes each. The obtained PRP was submitted to two preservation protocols, one being the freezing at -20 ° C (protocol F) and the other the gradual reduction of temperature to cryopreservation at -196 ° C (protocol N). In both protocols were used 6% DMSO as cryoprotectant and analysis made at zero (0) times and after 15, 30, 45 and 60 days after preserved. Neubauer chamber counts were performed, tests of 3- (4,5-dimethylthiazol-2yl)-2,5-diphenyl tetrazoline bromide (MTT) for cell viability, SDS-PAGE electrophoresis for protein identification and culture for fungi and mesophiles. It was verified that PRP preserved under N protocol had a higher number of platelets preserved when compared to protocol F (p <0.05). In the MTT test, the N protocol showed greater metabolic variation, but a higher platelet viability, confirmed by electrophoresis, where protein prevalence was observed in the cryopreserved samples. At the microbiological test, all the samples were free of contaminants of bacterial and fungal origin. The preservation method in liquid nitrogen was more effective than in freezer, keeping platelets more active metabolically, tissues repairing proteins presents and sterility.

Dissertação (Mestrado)

Plasma rico em plaquetas (PRP) é um subproduto sanguíneo obtido por meio de centrifugações e subsequente separação dos elementos sanguíneos. As plaquetas são responsáveis pela produção e liberação de fatores que favorecem o reparo de diferentes tecidos. Este estudo teve como objetivo comparar e avaliar a viabilidade do PRP após congelamento e criopreservação. Foram utilizados 12 coelhos da raça Nova Zelândia adultos saudáveis para coleta de 12 mL de sangue de cada animal por meio de punção cardíaca. Para protocolo de congelamento foi usada centrífuga Centribio 14 cm de diâmetro, e para o protocolo de preservação em nitrogênio foi usada centrífuga fria a 4ºC 18 cm de diâmetro Centurion Scientific K3 Series. Foram feitas, para ambos os protocolos, duas centrifugações, a 2000 rpm por 20 minutos cada. O PRP obtido foi submetido a dois protocolos de preservação, sendo um o congelamento em freezer a -20°C (protocolo F) e outro a redução gradativa de temperatura à criopreservação a -196°C (protocolo N), usando DMSO a 6% como crioprotetor e analisados nos momentos zero (0) e decorridos 15, 30, 45 e 60 dias de preservadas. Foram realizadas contagens em câmara de Neubauer, análises através dos testes do 3-(4,5-dimetiltiazol-2yl)-2,5-difenil brometo de tetrazolina (MTT) para viabilidade celular, eletroforese SDS-PAGE para identificação proteica e cultura para fungos e mesófilas. Verificou-se que o PRP preservado sob protocolo N apresentou maior número de plaquetas preservadas quando comparado ao protocolo F (p<0,05). Ao teste de MTT o protocolo N exibiu maior variação metabólica, porém, maior viabilidade das plaquetas, confirmado pela eletroforese, onde observou-se prevalência de proteínas nas amostras criopreservadas. Ao teste microbiológico, todas as amostras se mostraram livres de contaminantes de origem bacteriana e fúngica. O método de preservação em nitrogênio líquido foi mais eficaz do que em freezer, mantendo as plaquetas metabolicamente mais ativas, as proteínas de ação reparadora tecidual e a esterilidade.