Efeito da adição de glutationa na função e estresse oxidativo em sêmen ovino criopreservado | Effect of glutathione on the function and oxidative status of ovine cryopreserved sperm

Portugués. Os ácidos graxos poli-insaturados garantem fluidez à membrana plasmática do espermatozoide. No entanto, as duplas ligações presentes, os tornam mais susceptíveis aos efeitos nocivos da peroxidação lipídica. A adição do antioxidante Glutationa reduzida (GSH) poderia conferir proteção aos espermatozoides de ovinos submetidos à congelação contra os graves danos causados pelo estresse oxidativo. O objetivo do presente experimento foi avaliar se a GSH protege os espermatozoides ovinos criopreservados contra danos causados pelo estresse oxidativo. Foram colhidos ejaculados de quatro carneiros adultos. As análises convencionais foram: concentração, motilidade, vigor e morfologia. As análises funcionais foram: integridade de membrana, integridade acrossomal, integridade de cromatina e atividade mitocondrial. O sêmen foi criopreservado utilizando o diluidor Tris-gema-critrato, suplementado com GSH (controle, 1, 5 e 10 mM). As amostras foram submetidas ao protocolo de peroxidação lipídica induzida e subsequente quantificação das substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). As análises estatísticas foram realizadas utilizando o Sistema SAS para Windows. Não houve efeito do tratamento com GSH sobre as variáveis avaliadas pelos testes convencionais. A GSH diminuiu a proporção de acrossomas íntegros. Amostras tratadas com 5mM de GSH apresentaram menor percentual de células com membranas íntegras quando comparadas às amostras controle e aquelas tratadas com 10 mM; o percentual de células sem atividade mitocondrial foi influenciado pela GSH e também não houve efeito nas TBARS. As amostras do grupo controle foram mais susceptíveis à denaturação da cromatina. Em conclusão, a adição do antioxidante Glutationa reduzida confere proteção ao DNA e à atividade mitocondrial de espermatozoides de ovinos.

Inglés. The high susceptibility of sperm to the oxidative stress occurs especially due to high content of poly-unsaturated fattyacids (PUFAs) in its plasma membrane. The PUFAs provide the necessary fluidity to the plasma membrane. Howeverdouble bonds present in those fatty acids are more susceptible to oxidative stress. Studies in human indicate thatcryopreservation may lead to damages to the sperm due to oxidative stress. This study aimed to verify if the antioxidantglutathione (GSH) may protect ovine cryopreserved sperm against damages caused by oxidative stress. Semen samplesof four rams were cryopreserved using Tris-egg yolk extender supplemented with different concentrations of reducedglutathione (control, 1, 5 and 10 mM). After thawing, samples were evaluated using conventional (motility and vigor)and functional tests (membrane integrity and mitochondrial activity). Aliquots of each thawed sample were submitted toprotocol of induced lipid peroxidation using ascorbate (20 mM) and ferrous sulphate (4 mM), with further measurementof tiobarbituric acid reactive substances (TBARS), index of oxidative stress. No effect of GSH was observed on variablesassessed by conventional tests. GSH decreased the proportion of intact acrosomes. Samples treated with 5 mM GSHshowed lower percentage of intact membrane cells when compared to control samples and those treated with 10 mM.The percentage of cells with mitochondrial activity was affected by GSH, but no effect on TBARS. Samples from controlgroup were more susceptible to denaturation of chromatin. In conclusion, the addition of Glutathione (GSH) offersprotection to DNA and mitochondrial activity of ovine sperm.