Identification of a species-specific protein of toxigenic Fusarium verticillioides | Identificação de uma proteína espécie-específica de Fusarium verticillioides toxigênico

Inglés. Fusarium verticillioides is a primary corn pathogen and the main producer of fumonisins, a group of toxic secondary metabolites that can cause human and animal health hazards. In humans, epidemiological studies have associated fumonisins with esophageal and liver cancer and have been classified by the International Agency for Research on Cancer – IARC in group 2B (possibly carcinogenic to humans). The development of a rapid, sensitive and specific method to detect this fungus is essential and immunological detection is a promising approach. The discovery, identification and characterization of species-specific antigens are important for the development of a specific immunological technique. Therefore, the objective of this study was to identify the 67 kDa protein (p67) of F. verticillioides exoantigen which shows high potential to be a species-specific antigen.  p67 was identified by ultra-performance liquid chromatography tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS) and by in-gel analysis of the enzymatic activity (amylase and protease) using polyacrylamide gel co-polymerized with starch, gelatin, and bovine serum albumin. The analysis of in-gel trypsin digested p67 by mass spectrometry revealed two possible proteins: the protein related to aminopeptidase Y precursor of F. fujikuroi and the putative glucoamylase GMY2 of F. verticillioides. In order to confirm which of these proteins the p67 is, both the enzymatic activities were evaluated and showed that this protein presents an amylase activity indicating that p67 is the putative glucoamylase GMY2 of F. verticillioides.

Portugués. Fusarium verticillioides é um patógeno primário do milho e o principal produtor de fumonisinas, um grupo de metabólitos secundários tóxicos que podem causar danos tanto à saúde humana como animal. Em seres humanos, estudos epidemiológicos indicam a sua associação com o câncer esofágico e hepático, sendo classificadas pela Agência Internacional de Pesquisa sobre o Câncer no grupo 2B (possivelmente carcinogênico para seres humanos). O desenvolvimento de um método rápido, sensível e específico para detectar este fungo é essencial e a detecção imunológica é uma abordagem promissora. A descoberta, identificação e caracterização de antígenos espécie-específicos são importantes para o desenvolvimento de um método imunológico específico. Portanto, o objetivo deste estudo foi identificar a proteína de 67 kDa (p67) obtida do exoantigeno de F. verticillioides que possui um grande potencial em ser um antígeno espécie-específico.  p67 foi identificada por Cromatografia Líquida de Ultra Eficiência acoplada à Espectrometria de Massas (UPLC-MS/MS) e pela avaliação da sua atividade enzimática (amilase e protease) usando gel de poliacrilamida co-polimerizado com amido, gelatina, e soro albumina bovina. A análise da p67 digerida com tripsina por espectrometria de massas revelou duas proteínas possíveis: a proteína relacionada ao precursor da aminopeptidase Y de F. fujikuroi e a suposta glucoamilase GMY2 de F. verticillioides. Para confirmar qual dessas proteínas é a p67, ambas as atividades enzimáticas foram avaliadas e mostraram que esta proteína apresenta atividade amilase indicando que p67 é a suposta glucoamilase GMY2 de F. verticillioides.