Evaluación preliminar de la transcriptasa inversa de telomerasa bovina en la inmortalización y caracterización de macrófagos porcinos derivados de sangre periférica.

El cerdo doméstico es una especie clave en la producción porcina a nivel mundial; por lo tanto, las enfermedades infecciosas que afectan a estos animales pueden causar pérdidas económicas significativas en la industria porcina global. Varios patógenos porcinos atacan a los macrófagos, que son células del sistema inmunitario innato capaces de presentar antígenos a través de moléculas de clase II. Aunque los macrófagos defienden al huésped contra los patógenos, también pueden participar en los procesos infecciosos. Por ello, el cultivo de estas células puede utilizarse para crear modelos in vitro que permitan investigar genes relacionados con la inmunidad innata en cerdos y los mecanismos infecciosos de los patógenos porcinos. Sin embargo, las líneas celulares de macrófagos porcinos son limitadas, su procesamiento es lento y su obtención genera estrés en los animales. En este estudio, presentamos una metodología preliminar para obtener una nueva línea celular inmortalizada de macrófagos derivados de sangre periférica porcina mediante la transferencia de genes de la transcriptasa inversa de la telomerasa bovina (bTERT) a los macrófagos derivados de sangre periférica, utilizando el plásmido BovTET_pCI-neo. Estas células mostraron una morfología característica de macrófagos y sobrevivieron hasta 28 días. Expresaron marcadores de superficie como CD14+, CD80/86+ y SLA-II+. Estos resultados indican que estas células presentan las características morfológicas de los macrófagos. Además, la transferencia de los genes bTERT mediante el plásmido BovTET_pCI-neo también extendió los pasajes de replicación de los macrófagos porcinos derivados de sangre periférica. Sin embargo, la expresión de los marcadores fue baja y dependían del uso de geneticina para su replicación. Estos hallazgos sugieren que bTERT puede ser una estrategia efectiva, al menos de manera preliminar, como alternativa para inmortalizar macrófagos porcinos; no obstante, se requieren estudios con telomerasa porcina y análisis complementarios de la expresión de telomerasa y de la funcionalidad de los macrófagos mediante ensayos de fagocitosis y presentación de antígenos

The domestic pig is a key species in global swine production; therefore, infectious diseases affecting these animals can cause significant economic losses in the global swine industry. Several swine pathogens target macrophages, which are innate immune cells capable of presenting antigens via class II molecules. Although macrophages defend the host against pathogens, they can also participate in infectious processes. Thus, the culture of these cells can be used to create in vitro models to investigate genes related to innate immunity in pigs and the infectious mechanisms of swine pathogens. However, porcine macrophage cell lines are limited, processing is time-consuming, and obtaining them causes stress in animals. In this study, we present a preliminary methodology to obtain a new immortalized porcine peripheral blood-derived macrophage cell line by transferring bovine telomerase reverse transcriptase (bTERT) genes into peripheral blood-derived macrophages using the BovTET_pCI-neo plasmid. These cells showed characteristic macrophage morphology and survived for up to 28 days. They expressed surface markers such as CD14+; CD80/86+ and SLA-II+. These results indicate that these cells exhibit the morphological characteristics of macrophages. In addition, transferring the bTERT genes using the BovTET_pCI-neo plasmid also extended the replication passages of pig peripheral blood-derived macrophages. However, marker expression was low, and they were dependent on the use of geneticin for replication. These findings suggest that bTERT may be an effective strategy at least preliminarily as an alternative to immortalize porcine macrophages, however, studies with porcine telomerase are necessary and complemented with analyses of telomerase expression and macrophage functionality through phagocytosis and antigen presentation assays.

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Salud Animal