Caracterização fenotípica, genotípica e simbiótica de Azorhizobium sp. de Sesbania virgata (Caz.) Pers.

Thirty rhizobia strains with cultural characteristics on YMA similar to Azorhizobium caulinodans (alcalinization, few EPS "extracelular polissacaride production") isolated from the native leguminous species Sesbania virgata in different regions at south east Brazil (Minas Gerais and Rio de Janeiro states) were studied. Genetic, phenotypic and symbiotic characteristics were performed, including cultural and physiological tests, polyacrilamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) of total proteins, restriction fragment length polymorphism (RFLP) of Polimerase Chain reaction (PCR) amplified 16S rDNA and intergenic space between 16S and 23S rDNA and the total sequence of bases of 16S rDNA. In Ali isolates of Azorhizobium sp. were able to fíx nitrogen in the free- living state in solid and semi-solid médium. The nitrogenase activity mesured by acetylene reduction activity was smaller than that of the strain ORS 571T of Azorhizobium caulinodans. SDS-PAGE of total proteins of all strains were relatively similar, but, small difíerences discriminated these strains into three groups. Analysis of RFLP showed differences between Azorhizobium sp. and Azorhizobium caulinodans. Total sequence of 16S rDNA shows difíerences in twenty nine different bases in BR 5401T of Azorhizobium sp. in relation to the most similar published sequence, ORS 571T Azorhizobium caulinodans. Plant infection tests to study the symbiotic relationships among Azorhizobium sp. nov BR 5401T and Sesbania virgata (Caz.) Pers with others partners were carried out in Leonardjars. When diverse legume species were inoculated with BR 5401 , only S. virgata nodulated efficiently. When Sesbania virgata was inoculated with type or reference strains of species belonging to the genera Rhizobium, Bradyrhizobium, Sinorhizobium, Mezorhizobium and Azorhizobium, nodulation occurred only with the inoculation of the homologue strain BR 5401 . It was demonstrated that this group is phenotypically and phylogenetically different from Azorhizobium caulinodans and other rhizobiaspecies described. It was also found that there is a high specific relationship, mainly concerning to nitrogen fixation, between Azorhizobium sp. BR5401T and Sesbania virgata.

Trinta estirpes de rizóbio com características culturais em meio de cultura YMA, similares a Azorhizobium caulinodans (alcalinização e pouca produção de goma) isoladas da leguminosa nativa Sesbania virgata em diferentes locais do sudeste do Brasil (Estados de Minas Gerais e Rio de Janeiro) foram estudados. Características fenotípicas e genotípicas foram investigadas, incluindo testes fisiológicos, perfil de proteínas totais, perfis de restrição do gene rDNA 16S e espaço intergênico (rDNA 16S-23S) amplificados e sequenciamento total da bases do rDNA 16S. Constatou-se a fixação de nitrogênio em meio de cultura livrede N (sólido e semi-sólido) para os isolados às Azorhizobium sp. nov., porém com atividade da nitrogenase menor que para a estirpe ORS 571 T de Azorhizobium caulinodans. O perfil de proteínas totais foi relativamente similar para as 30 estirpes, mas pequenas diferenças as discriminaram em três grupos. As análises de RFLP mostraram diferenças entre a espécie proposta e Azorhizobium caulinodans .O sequenciamento total do 16S rDNA encontrou 29 bases diferentes em BR 5401T de Azorhizobium sp em relação à seqüência mais similar publicada ORS 571 Azorhizobium caulinodans. Testes de infecção em plantas para estudar as relações simbióticas entre Azorhizobium sp. BR 5401T, e Sesbania virgata (Caz.) Pers com outros parceiros foram realizados em vasos de Leonard. Quando diversa espécies de leguminosas foram inoculadas com BR 5401T somente S. virgata nodulou eficientemente. Quando Sesbania virgata foi inoculada com estirpes tipo ou referência de espécies dos gêneros Rhizobium, Bradyrhizobium, Sinorhizobium, Mezorhizobium e Azorhizobium, a nodulação ocorreu somente com a inoculação da estirpe homologa BR 5401T. Assim, demostrou-se que este grupo estirpes é fenotipicamente e filogeneticamente diferente de Azorhizobium caulinodans e outras espécies de rizóbio atualmente descritas e possui relação simbiótica altamente específica quanto à fixação de nitrogênio com Sesbania virgata.