Solubilization, delipidation and reactivation of lutoidic membrane pyrophosphatase enzyme from Hevea brasiliensis latex

anglais. Pyrophosphatase (PPase) enzyme has been isolated from lutoidic membrane of latex H. brasiliensis. PPase plays an important role in hydrolysis of pyrophosphate (PPi) and the energy release could be used as H+-pump into lutoid and function as a pH stat biophysics like vacuolar H+-pumping ATPase. For the purpose to demonstrate the capability as a proton pumps, this enzyme need to be solubilized, delipidated and reconstituted into artificial membrane proteoliposome. Among nine detergents tested at different concentrations, only octylglucoside 80 mM, lysophosphatidylcholine 1.5 percent and Triton X-100 1 percent gave an optimal yield with solubilization rate between 88-90 percent and the precentage of PPase recovery was 90 percent compared to the activity before solubilization. Solubilized Pase lost its total activity after delipidation with cholate 2 percent. However, delipidated enzyme could be reactivated by the addition of azolectin phospholipid 20-30 mg/ml, phosphatidyl inositol and phosphatidyl choline or combination of azolectin and phosphatidyl inositol (20:5) with the activity of 144-53 percent compare to the control (before delipidation). While phoshatidyl glycerol and phosphatidic acid 10-20 mg/ml were unable to reactivated the delipidated enzyme

indonésien. Enzim pirofosfatase (PPase) telah diisolasi dari membran lutoid asal latek H. brasiliensis. Selain PPase tersebut berperan dalam menghidrolisis pirofosfat (PPi), energi yang dibebaskan dapat digunakan sebagai pompa proton ke dalam lutoid dan berfungsi sebagai pH stat biofisik seperti halnya ATPase-pompa H+-tonoplast. Untuk tujuan pembuktian dalam kemampuannya sebagai pompa proton, maka enzim tersebut perlu disolubilisasi, didelipidasi dan direkonstitusi ke dalam membran buatan proteoliposom. Diantara 9 deterjen yang diuji dengan berbagai konsentrasi, maka hanya oktilglukosid 80 mM, lisofosfatidilkolin 1.5 persen dan Triton X-100 1 persen, yang memberikan hasil optimal dengan tingkat solubilisasi antara 88-90 persen dan aktivitas PPase 90 persen dibanding sebelum solubilisasi. PPase tersolubilisasi akan hilang total aktivitasnya setelah didelipidasi oleh kolat 2 persen. Namun enzim terdelipidasi dapat menjadi aktif kembali yaitu setelah direaktivasi dengan fosfolipid asolektin 2-30 mg/ml, fosfatidil inositol dan fosfatidil kolin atau campuran asolektin dan fosfatidil inositol (20:5) dengan aktivitas 144-153 persen dibanding kontrol (sebelum didelipidasi). Sedangkan fosfatidil gliserol maupun asam fosfatidik 10-20 mg/ml tidak mampu mereaktivasi enzim terdelipidasi