Characterization and production in Escherichia coli of a dehydrin involved in cold stress response in Solanum commersonii
2004
Massarelli, I. (Naples Univ., Portici (Italy). Dipartimento di Scienze del Suolo, della Pianta e dellAmbiente) | Costa, A. (Consiglio Nazionale delle Ricerche, Portici, Naples (Italy). Istituto di Genetica Vegetale) | Palma, M. De (Consiglio Nazionale delle Ricerche, Portici, Naples (Italy). Istituto di Genetica Vegetale) | Leone, A. (Salerno Univ. (Italy). Dipartimento di Scienze Farmacologiche) | Grillo, S. (Consiglio Nazionale delle Ricerche, Portici, Naples (Italy). Istituto di Genetica Vegetale)
anglais. Dehydrins are a group of proteins belonging to the large family of LEA proteins (late embryogenesis abundant), commonly induced by different environmental stresses as well as during late stages of seed maturation. In the present study, we have characterized and analyzed the expression, during cold stress, of a previously isolated Solanum commersonii dehydrin (Scdhy) gene. In order to obtain a substantial amount of dehydrin protein for subsequent structural and functional studies, we have constructed a bacterial expression vector, derived from Qiagen's PQE-31, coding for the dehydrin Scdhy fused to 6X-Hys at N-terminal. The resulting plasmid pQE-Scdhy was over-expressed in Escherichia coli and the soluble fusion protein was purified from the celllysate by Ni-nitrilotriacetic acid agarose chromatography. The methodology adopted was easy, extremely rapid and efficient and allowed the recovery of up to 7 mg of protein per litre of E. coli culture. The availability of a good quantity of pure protein represents a pre-requisite to perform further studies on the protective role of this class of proteins during cellular response to osmotic stresses
Afficher plus [+] Moins [-]italien. [Le deidrine sono un gruppo di proteine appartenenti alla grande famiglia delle proteine LEA (late embryogenesis abundant, abbondanti nella fase terminale dell'embriogenesi), indotte comunemente da stress ambientali diversi, così come negli ultimi stadi della maturazione del seme. Nel presente studio abbiamo caratterizzato e analizzato l'espressione, nel corso dello stress da freddo, di un gene della deidrina (Scdhy) di Solanum commersonii, isolato in precedenza. Allo scopo di ottenere una quantità consistente di deidrina per successivi studi strutturali e funzionali, abbiamo costruito un vettore di espressione batterico, derivato dal PQE-31 della Qiagen, codificante per Scdhy della deidrina fuso a 6X-Hys al terminale N. Il plasmidio pQE-Scdhy risultante era sovraespresso in Escherichia coli e la proteina di fusione solubile è stata purificata dal lisato di cellule mediante cromatografia su agarosio Ni-acido nitrilotriacetico. La metodologia adottata era semplice, estremamente rapida ed efficiente e ha consentito il recupero fino a 7 g di proteina per litro di coltura di E. coli. La disponibilità di una buona quantità di proteina pura rappresenta un pre-requisito per condurre ulteriori studi sul ruolo protettivo di questa classe di proteine nel corso della risposta cellulare agli stress osmotici.]
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